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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR杂带较多，阴性对照也有很多杂带，急求
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521888

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR杂带较多，阴性对照也有很多杂带，急求 已有1人参与

小弟设计了8对引物，用于cDNA的PCR，用primer5设计，NCBI上验证引物的特异性也比较好，但不知道为什么阴性对照都能跑出杂带来，并且杂带很多，加入模板也有很多杂带，水是新取的一管高压过的超纯水，premix也是新取的，我也试了60度和58度的退火温度，不知道是什么原因，求大神告知，一共就11个金币了
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  • 附件 1 : mk引物.doc
    • 2014-06-19 15:21:05, 617 K
  • 附件 2 : pcr图片.doc
    • 2014-06-19 15:31:08, 150.5 K

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1楼 2014-06-19 15:31:37
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bai0904

新虫 (初入文坛)
跑大胶试一试~可能是引物设计的原因~
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多的是你不知道的事
5楼2014-08-21 18:51:21
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
521888(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:41:51
没其他技巧，引物不够好，扩增的非特异性情况就多

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2楼2014-06-19 17:03:59
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-19 17:03:59
没其他技巧，引物不够好，扩增的非特异性情况就多

用primerblast设计吧，那个更好使

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3楼2014-06-19 17:04:37
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521888

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-19 17:03:59
没其他技巧，引物不够好，扩增的非特异性情况就多

你好，那为什么 阴性对照也有条带，小弟不是很明白。
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4楼2014-06-20 14:37:46
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