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521888

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR杂带较多,阴性对照也有很多杂带,急求 已有1人参与

小弟设计了8对引物,用于cDNA的PCR,用primer5设计,NCBI上验证引物的特异性也比较好,但不知道为什么阴性对照都能跑出杂带来,并且杂带很多,加入模板也有很多杂带,水是新取的一管高压过的超纯水,premix也是新取的,我也试了60度和58度的退火温度,不知道是什么原因,求大神告知,一共就11个金币了
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  • 2014-06-19 15:21:05, 617 K
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  • 2014-06-19 15:31:08, 150.5 K

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bai0904

新虫 (初入文坛)

跑大胶试一试~可能是引物设计的原因~
多的是你不知道的事
5楼2014-08-21 18:51:21
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
521888(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:41:51
没其他技巧,引物不够好,扩增的非特异性情况就多

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-06-19 17:03:59
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-19 17:03:59
没其他技巧,引物不够好,扩增的非特异性情况就多

用primerblast设计吧,那个更好使

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-06-19 17:04:37
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521888

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-19 17:03:59
没其他技巧,引物不够好,扩增的非特异性情况就多

你好,那为什么 阴性对照也有条带,小弟不是很明白。
4楼2014-06-20 14:37:46
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