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fghjkyt

新虫 (正式写手)

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专业: 化学生物学与生物有机化学

[交流] 分子克隆（特别是平末端连接）新方法！！已有1人参与

我们对经典基因克隆方法进行了小改进，有效果，特别是对一些有挑战性的克隆，如平末端连接，单酶切产物连接，和某些双酶切连接，有用：
Gao S, Li Y, Zhang J, Chen H, Ren D, Zhang L, An Y. A modified version of the digestion-ligation cloning method for more efficient molecular cloning. Anal Biochem. 2014 453: 55-57.
以下是论文的链接：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256
由于时间和实验条件有限，水平也有限，做得不是很好，也不系统。从我们为数不多的经验来看，有的时候，它对平末端的连接效率比粘性末端高，这个很奇怪，我们也不知道为什么。
很简单方便，如果你能用经典克隆方法顺利克隆那当然好，如果用经典方法不顺利时，倒是可以一试，希望能有帮助。

需要注意的是：
1. 初始连接的体系应该大点， 100-200ul
2. 胶回收的DNA的浓度会很低，但是没有关系，因为本步是分子内自连，本来就要求DNA的浓度低。
本方法用了两步连接反应。实际上传统连接方法之所以有时候效率低，是因为要求一步连接就要同时两端都得连上，有时候很不容易，而我们的方法，则是把一步有挑战性的双连接变成了两步没有挑战的单连接。
这种方式，对于平末端连接显得更有意义。大家想想，一次连接就要求把两个平末端同时都连上，那得多难啊。

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