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分子克隆 （特别是平末端连接）新方法！！ 已有1人参与
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我们对经典基因克隆方法进行了小改进， 有效果， 特别是对一些有挑战性的克隆， 如平末端连接，单酶切产物连接，和某些双酶切连接，有用： Gao S, Li Y, Zhang J, Chen H, Ren D, Zhang L, An Y. A modified version of the digestion-ligation cloning method for more efficient molecular cloning. Anal Biochem. 2014 453: 55-57. 以下是论文的链接： http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256 由于时间和实验条件有限，水平也有限， 做得不是很好， 也不系统。从我们为数不多的经验来看， 有的时候，它对平末端的连接效率比粘性末端高，这个很奇怪，我们也不知道为什么。 很简单方便，如果你能用经典克隆方法顺利克隆那当然好， 如果用经典方法不顺利时，倒是可以一试，希望能有帮助。 需要注意的是： 1. 初始连接的体系应该大点， 100-200ul 2. 胶回收的DNA的浓度会很低，但是没有关系，因为本步是分子内自连， 本来就要求DNA的浓度低。 本方法用了两步连接反应。 实际上传统连接方法之所以有时候效率低，是因为要求一步连接就要同时两端都得连上，有时候很不容易， 而我们的方法，则是把一步有挑战性的双连接 变成了两步没有挑战的单连接。 这种方式 ，对于平末端连接显得更有意义。 大家想想， 一次连接就要求把两个平末端同时都连上， 那得多难啊。 |
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2014-07-14 16:47:31, 578.51 K
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