【答案】应助回帖

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11楼2014-06-18 09:45:00

小冀-

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8楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-17 17:59:44
连接效率上去了，不做蓝白斑也行，我都是直接上氨苄板筛的
...

我也是氨苄平板筛的···

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12楼2014-06-18 09:45:53

古月木木

引用回帖:

10楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-18 09:33:20
我这边的阳性率已经接近100%，你觉得还有必要蓝白斑吗？
...

13楼2014-06-18 09:58:24

忘记将来

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19T 自连很正常，他质量没那么好，建议4℃ 过夜，增加连接效率

14楼2014-06-18 10:07:14

Neo2000

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11楼: Originally posted by 小冀- at 2014-06-18 09:45:00
你是说可能是载体的问题吗？...

你可以考虑我说的那个t载体，价钱和你的19t只差几十块，最好是单独再配连接酶，建议用neb的

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15楼2014-06-18 10:21:46

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引用回帖:

14楼: Originally posted by 忘记将来 at 2014-06-18 10:07:14
19T 自连很正常，他质量没那么好，建议4℃ 过夜，增加连接效率

连接效率和温度扯不上太大关系，关键是载体与外源片段的契合度以及分子比例

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16楼2014-06-18 10:23:14

飞约疯人院

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小冀-: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-10-23 21:51:24

我们实验室以前用的都是18t19t，可是后来怎么都不行了，实验做不出来，建议你用T-easy吧，很好很适用。

人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。

17楼2014-06-18 10:24:48

draco1987

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商品化载体按理说应该是预先线性化的成品，老是出现自连有可能是载体Kit本身有问题吧？你要相信，Takara之流的商品质量绝对没你想象的好。换个批次的Kit试试吧，或者换个别的载体，反正你用的T载体也就用来克隆测序什么的，替代品多了去了。

18楼2014-06-18 11:59:32

draco1987

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17楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-06-18 10:24:48
我们实验室以前用的都是18t19t，可是后来怎么都不行了，实验做不出来，建议你用T-easy吧，很好很适用。

Takara的T载体Kit阶段性抽风已经不是一两年了，习惯了吧，下个批次就好了，毕竟还是相对便宜好用。

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19楼2014-06-18 12:02:16

Echo熊熊

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请问PMD19T的两个末端都是T末端如何自连呢？

20楼2015-01-21 18:23:45