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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 与PMD-19T连接问题
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【悬赏金币】回答本帖问题，作者小冀-将赠送您 62 个金币

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-17 14:27:25
那个载体自连率是很高的，它不是都带有t的突出末端的。我都不买他们家的载体用，命中率不好
...

你是说可能是载体的问题吗？
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···
11楼2014-06-18 09:45:00
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
8楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-17 17:59:44
连接效率上去了，不做蓝白斑也行，我都是直接上氨苄板筛的
...

我也是氨苄平板筛的···
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···
12楼2014-06-18 09:45:53
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古月木木
引用回帖:
10楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-18 09:33:20
我这边的阳性率已经接近100%，你觉得还有必要蓝白斑吗？
...

ok
13楼2014-06-18 09:58:24
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忘记将来

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小冀-: 金币+2, ★有帮助 2014-06-18 13:16:10
小冀-: 金币+1 2014-10-23 21:51:04
19T 自连 很正常，他质量 没那么好，建议4℃ 过夜，增加连接效率
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14楼2014-06-18 10:07:14
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小冀-: 金币+3 2014-10-30 12:15:45
引用回帖:
11楼: Originally posted by 小冀- at 2014-06-18 09:45:00
你是说可能是载体的问题吗？...

你可以考虑我说的那个t载体，价钱和你的19t只差几十块，最好是单独再配连接酶，建议用neb的

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15楼2014-06-18 10:21:46
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小冀-(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-18 10:43:35
小冀-: 金币+2 2014-06-18 13:15:57
引用回帖:
14楼: Originally posted by 忘记将来 at 2014-06-18 10:07:14
19T 自连 很正常，他质量 没那么好，建议4℃ 过夜，增加连接效率

连接效率和温度扯不上太大关系，关键是载体与外源片段的契合度以及分子比例

[ 发自小木虫客户端 ]
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16楼2014-06-18 10:23:14
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小冀-(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-18 10:43:26
小冀-: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-10-23 21:51:24
我们实验室以前用的都是18t19t，可是后来怎么都不行了，实验做不出来，建议你用T-easy吧，很好很适用。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
17楼2014-06-18 10:24:48
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draco1987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小冀-: 金币+2, ★有帮助 2014-06-18 13:15:16
商品化载体按理说应该是预先线性化的成品，老是出现自连有可能是载体Kit本身有问题吧？你要相信，Takara之流的商品质量绝对没你想象的好。换个批次的Kit试试吧，或者换个别的载体，反正你用的T载体也就用来克隆测序什么的，替代品多了去了。
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18楼2014-06-18 11:59:32
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draco1987

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-06-18 10:24:48
我们实验室以前用的都是18t19t，可是后来怎么都不行了，实验做不出来，建议你用T-easy吧，很好很适用。

Takara的T载体Kit阶段性抽风已经不是一两年了，习惯了吧，下个批次就好了，毕竟还是相对便宜好用。
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19楼2014-06-18 12:02:16
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Echo熊熊

新虫 (初入文坛)
请问PMD19T的两个末端都是T末端如何自连呢？
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20楼2015-01-21 18:23:45
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