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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 跑SDS-PAGE时 maker条带还不错可是蛋白条带特别浅 求指点
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buxiangxue

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yangfanv at 2014-06-17 12:35:07
23ug/ug！！！！楼主肯定搞错了～～楼主定量怎么定的...

考​马​斯​亮​兰​法 ​B​r​a​d​f​o​r​d​法  1mg/mlBSA  0.15mol/lNacl 考马斯亮蓝G-250 标准曲线 R平方0.99
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11楼2014-06-17 14:31:31
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buxiangxue

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yangfanv at 2014-06-17 12:35:07
23ug/ug！！！！楼主肯定搞错了～～楼主定量怎么定的...

用​考​马​斯​亮​兰​法​​B​r​a​d​f​o​r​d​法  ​考​马​斯​亮​兰​G-250 5ML  0.15mol/L  Nacl  1mg/ml BSA
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12楼2014-06-17 18:17:55
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
9楼: Originally posted by buxiangxue at 2014-06-17 11:36:17
条带是弥散的么，我刚做蛋白没经验    蛋白被降解？我的蛋白是固体保存的 用样品处理液处理过之后蛋白不就变性了嘛 不过处理的时候都是常温，哪里有问题，求指教...

可能是在你提取蛋白的过程中，你再做一下试吧，具体问题了在那里我也不清楚的，从你的电泳图上我只能看到这么多
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13楼2014-06-17 21:02:55
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yangfanv

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by buxiangxue at 2014-06-17 14:31:31
考​马​斯​亮​兰​法 ​B​r​a​d​f​o​r​d​法  1mg/mlBSA  0.15mol/lNacl 考马斯亮蓝G-250 标准曲线 R平方0.99...

楼主的定量有问题啊～～都23ug/ul还上了15ul样品～～你算算你一共有多少总蛋白～一般我们的SDS-PAGE胶不可能有这个承载量吧～所以我觉得楼主定量可能出问题了～～即便降解了那下面条带应该也很浓吧～～
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路要慢慢地走～但不能停
14楼2014-06-18 08:50:52
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qlw4567

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-06-18 11:31:03
除了你能排除是以上同学们说的你浓度的问题外，我觉得如果你所有浓度都是这么浅，是不是染色的时候时间不够呢？
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努力和媳妇一起上完博士
15楼2014-06-18 09:05:17
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buxiangxue

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by yangfanv at 2014-06-18 08:50:52
楼主的定量有问题啊～～都23ug/ul还上了15ul样品～～你算算你一共有多少总蛋白～一般我们的SDS-PAGE胶不可能有这个承载量吧～所以我觉得楼主定量可能出问题了～～即便降解了那下面条带应该也很浓吧～～...

确实算错啦
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16楼2014-06-18 11:20:48
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buxiangxue

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by ganchao1776 at 2014-06-17 21:02:55
可能是在你提取蛋白的过程中，你再做一下试吧，具体问题了在那里我也不清楚的，从你的电泳图上我只能看到这么多...

谢谢
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17楼2014-06-18 11:24:23
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

上样量太少，SDS-PAGE考染灵敏度在单条带0.1ug，低了就银染吧，要不就蛋白浓缩，加大上样量
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爱拼才会赢
18楼2014-06-20 22:34:40
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pengchenping

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的样品浓度太低啦

[ 发自小木虫客户端 ]
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19楼2014-07-07 20:37:21
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院士陈

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这是必须的  你 marker是定量的    但是你蛋白的量又不是按照同一浓度，  我是指在你取样的时候样本的量
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20楼2015-03-10 18:15:25
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