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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 跑SDS-PAGE时 maker条带还不错可是蛋白条带特别浅 求指点
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buxiangxue

新虫 (初入文坛)

[求助] 跑SDS-PAGE时 maker条带还不错可是蛋白条带特别浅 求指点 已有8人参与

我提的是小麦叶片的全蛋白，跑的SDS胶maker都还挺清楚 可是蛋白条带就是特别浅 后来说是上样蛋白量少就加到100微克左右 上样体积是15微克 可是条带依然很浅  这个是图   求指点

跑SDS-PAGE时 maker条带还不错可是蛋白条带特别浅 求指点
20140606_173634.jpg
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1楼 2014-06-16 11:12:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

HYZ221314

至尊木虫 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
buxiangxue: 金币+2 2014-06-16 11:27:47
蛋白浓度太低了，可以重新定量试试

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buxiangxue
青山不断，绿水长流
2楼2014-06-16 11:13:28
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yangfanv

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主制备样品之前做个定量～～很显然图中的样品量肯定没有达到楼主说的15ug～～不然考染后肯定很清楚～～
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路要慢慢地走～但不能停
4楼2014-06-16 17:40:41
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
看你图的样子，条带很弥散，好像蛋白被降解了，我估计你要重新做，下次做的时候加些蛋白酶抑制剂。你测到的含数据是准确的，但反应的不是蛋白的
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7楼2014-06-17 09:11:54
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古月木木

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以做个梯度，从5ul，10ul，15ul，20ul。。。找个最合适的梯度，一块胶就可以比较出来了
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8楼2014-06-17 09:14:32
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

上样量太少，SDS-PAGE考染灵敏度在单条带0.1ug，低了就银染吧，要不就蛋白浓缩，加大上样量
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爱拼才会赢
18楼2014-06-20 22:34:40
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普通回帖

buxiangxue

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by HYZ221314 at 2014-06-16 11:13:28
蛋白浓度太低了，可以重新定量试试

大概定量到多少呢
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3楼2014-06-16 11:17:07
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wangxueflower

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上样量好像太少了，加大上样量吧
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花开花落，云卷云舒
5楼2014-06-16 21:35:12
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buxiangxue

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yangfanv at 2014-06-16 17:40:41
楼主制备样品之前做个定量～～很显然图中的样品量肯定没有达到楼主说的15ug～～不然考染后肯定很清楚～～

怎样做定量，我做标准曲线了测的蛋白浓度23 μg/μl 和 9μg/μl 然后上样体积是10μl 上样蛋白就是20μg 的这种比例上的样
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6楼2014-06-17 08:47:47
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buxiangxue

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ganchao1776 at 2014-06-17 09:11:54
看你图的样子，条带很弥散，好像蛋白被降解了，我估计你要重新做，下次做的时候加些蛋白酶抑制剂。你测到的含数据是准确的，但反应的不是蛋白的

条带是弥散的么，我刚做蛋白没经验    蛋白被降解？我的蛋白是固体保存的 用样品处理液处理过之后蛋白不就变性了嘛 不过处理的时候都是常温，哪里有问题，求指教
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9楼2014-06-17 11:36:17
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yangfanv

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by buxiangxue at 2014-06-17 08:47:47
怎样做定量，我做标准曲线了测的蛋白浓度23 μg/μl 和 9μg/μl 然后上样体积是10μl 上样蛋白就是20μg 的这种比例上的样...

23ug/ug！！！！楼主肯定搞错了～～楼主定量怎么定的
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路要慢慢地走～但不能停
10楼2014-06-17 12:35:07
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