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爱骨头的鱼

铜虫 (初入文坛)

[求助] 如何从土壤中分离金黄色葡萄球菌 已有2人参与

要做关于环境中的金黄色葡萄球菌,分离了很多次都失败了,不知哪位高手能够指点一下,小弟感激不尽!
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madynihao

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

第一,金黄色葡萄球菌的检验
样品处理:无菌取25g或25mL食品样品,放入225mL灭菌生理盐水中均质,制成10-1稀释液。
增菌培养:将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中,37°C培养24小时。
分离培养:将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板,置37°C培养24~48小时。金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落,大而凸起,表面光滑,周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落为圆形,直径2~3mm,颜色灰或黑色,周围有一浑浊带。
染色观察:从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色,金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性,显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜,直径0.5~1μm。
血浆凝固酶试验:吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌试液浸液肉汤24小时培养物充分混匀,置36±1°C培养,每隔半小时观察一次,连续观察6小时,出现凝固,即将小试管倾斜或倒置时,内容物不流动,判为阳性。同时做阴阳性对照。耐热核酸酶试验:将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min,用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板,36±1°C培养24小时,在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。
第二,金黄色葡萄球菌肠毒素检测
金黄色葡萄球菌肠毒素的检测主要有动物试验、血清学试验、免疫荧光试验及酶联免疫吸附等方法,在此就不一一赘述。
8楼2019-05-27 15:48:49
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原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物


【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
你是怎样分离的?
2楼2014-06-16 09:33:19
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爱骨头的鱼

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原罪的祷告 at 2014-06-16 09:33:19
你是怎样分离的?

我用稀释涂布的方法,稀释了5个梯度,接种到血平板上,就是分离不出金黄色葡萄球菌。
4楼2014-06-16 21:09:19
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原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物


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引用回帖:
4楼: Originally posted by 爱骨头的鱼 at 2014-06-16 21:09:19
我用稀释涂布的方法,稀释了5个梯度,接种到血平板上,就是分离不出金黄色葡萄球菌。...

血平板确实有些不太好分辨啊,怎么不用显色培养基或者Baird-Parker 平板分离?这样金葡的菌落特征要明显很多,然后选可疑的菌落做个革兰氏染色就差不多能确定是金葡了!
5楼2014-06-17 09:15:16
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