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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 5‘ RACE时片段不完整
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douxx

新虫 (小有名气)

[交流] 5‘ RACE时片段不完整 已有3人参与

最近通过设计简并引物获得了目的基因的3’RACE片段，
再根据得到的3’RACE片段设计反向引物以得到5‘端，
但是对5’端测序后发现，均比预期的短几十个碱基。

有没有遇到过这种情况的，指点一下
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1楼 2014-06-11 21:38:34
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-11 23:39:05
只能说你的做法有点不走寻常路，也有可能你没说清楚，一般情况下，race完了要从头到尾扩一次，确保正确

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2楼2014-06-11 22:26:33
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匿名

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★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-12 13:01:00
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3楼2014-06-12 09:56:34
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qsy1115

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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3楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2014-06-12 09:56:34
最好的办法是3‘RACE 加上5’染色体步移  不要直接做5‘RACE 费时费力

你好，我刚接触分子方面，做过表达量。现在想学习下race克隆技术，有具体方法和注意事项么？感谢，qsy1115@sina.cn
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4楼2014-06-14 17:32:51
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Neo2000

木虫 (著名写手)
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3楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2014-06-12 09:56:34
最好的办法是3‘RACE 加上5’染色体步移  不要直接做5‘RACE 费时费力

遇到utr里有内含子你就死定了

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5楼2014-06-14 17:56:57
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匿名

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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6楼2014-06-14 18:37:14
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Neo2000

木虫 (著名写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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6楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2014-06-14 18:37:14
不要说得那么绝对，内含子肯定会碰到，但是你染色体步移又不是只做一次，肯定要多次步移。这个方法笨点但是切实可行，在多次得不到完整片段的时候可以试一下。...

你这个主意貌似很非主流哦，你做了5'和3'要干嘛，不就是获得全长吗？5'遇到内含子是不能排除，你敢扩全长吗？发文章肯定被编辑卡死的，还是老老实实重新设计引物，重新做吧。

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7楼2014-06-14 19:23:24
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匿名

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-14 20:55:28
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8楼2014-06-14 19:38:45
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匿名

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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9楼2014-06-14 20:13:28
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douxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2014-06-12 09:56:34
最好的办法是3‘RACE 加上5’染色体步移  不要直接做5‘RACE 费时费力

染色体步移是不是跟巢式PCR一样？
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10楼2014-06-24 10:52:05
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