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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 差显二次PCR产物大小与PAGE胶上的不一致
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 差显二次PCR产物大小与PAGE胶上的不一致

做逆境胁迫差显时，将差异带切胶煮沸回收，以回收产物为模板做二次PCR，但是二次PCR产物跑琼脂糖电泳总是比在PAGE上小很多，比如在PAGE上有500bp，二次PCR时就只有200-300bp，测序后发现二次PCR产物两端引物是对的，并且产物的确也是一些和逆境胁迫相关的基因片段。虽然有结果了，但是二次PCR结果和差显不一致，大家有没有遇到过这种情况，谁能帮忙解释下。
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1楼 2014-06-09 20:52:08
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxw8945 at 2014-09-01 20:06:25
我也有这种情况，但是是二次PCR之后，目标条带变大，不知道为什么，对结果有影响吗，因为现在还没有办法测序，好苦恼

为什么没办法测序呢？我就是直接把二次PCR的产物回收连载体测序。
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3楼2014-09-01 22:37:11
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lxw8945

铁虫 (小有名气)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-01 21:04:56
我也有这种情况，但是是二次PCR之后，目标条带变大，不知道为什么，对结果有影响吗，因为现在还没有办法测序，好苦恼
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-01 20:06:25
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