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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 差显二次PCR产物大小与PAGE胶上的不一致

做逆境胁迫差显时,将差异带切胶煮沸回收,以回收产物为模板做二次PCR,但是二次PCR产物跑琼脂糖电泳总是比在PAGE上小很多,比如在PAGE上有500bp,二次PCR时就只有200-300bp,测序后发现二次PCR产物两端引物是对的,并且产物的确也是一些和逆境胁迫相关的基因片段。虽然有结果了,但是二次PCR结果和差显不一致,大家有没有遇到过这种情况,谁能帮忙解释下。
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lxw8945

铁虫 (小有名气)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-01 21:04:56
我也有这种情况,但是是二次PCR之后,目标条带变大,不知道为什么,对结果有影响吗,因为现在还没有办法测序,好苦恼
2楼2014-09-01 20:06:25
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxw8945 at 2014-09-01 20:06:25
我也有这种情况,但是是二次PCR之后,目标条带变大,不知道为什么,对结果有影响吗,因为现在还没有办法测序,好苦恼

为什么没办法测序呢?我就是直接把二次PCR的产物回收连载体测序。
3楼2014-09-01 22:37:11
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