应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 2.3kb 大片段pcr 求赐教
53/1返回列表
查看: 2700  |  回复: 32
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hailey

银虫 (小有名气)

[求助] 2.3kb 大片段pcr 求赐教 已有4人参与

请路过的虫友大神们看看，我的片段是2.3kb的，GC 含量是59.61%  ，所以就没用GC buffer 。
所用PCR体系25ul  ,
10*transtart buffer 2.5ul
transtart Taq  ase    0.5ul
dNTPs  1ul
primer1  1ul
primer    1ul
cDNA   2ul
dd 水  17ul  

95度 5min
94度 30s
51度 -61度  设置梯度 各30s
72度 2.5min
72度 10min
35个循环

没有P出来目的条带，什么都没有，本想上传图片的，网络不好没有上传成功

求赐教
回复此楼

» 猜你喜欢
时刻为梦想而战！！
1楼 2014-06-02 00:19:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hailey

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhghlj at 2014-06-03 10:18:53
是不是也要换一下适合长片段PCR使用的酶呢？

同实验室的师姐P过3kb的，人家用的普通酶就P出来了，然后只是用高保真酶来减少他的突变率，但是我P的目的条带根本就没有出来呢，所以感觉即使换了高保真酶也不一定出结果
赞一下 回复此楼
时刻为梦想而战！！
22楼2014-06-07 19:45:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答

BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-02 10:49:45
换cDNA模板。
2.3k不大，cDNA模板质粒不高通常是P不出来的原因。另外，cDNA是有组织特异性的，你的基因确定在这个组织或细胞系中有比较高的表达？
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-02 07:34:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hailey

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by BioChen at 2014-06-02 07:34:15
换cDNA模板。
2.3k不大，cDNA模板质粒不高通常是P不出来的原因。另外，cDNA是有组织特异性的，你的基因确定在这个组织或细胞系中有比较高的表达？

嗯嗯。。。是有高表达的，可以查到相关文献的，今天准备加10* GC  enhanger 试试..
赞一下 回复此楼
时刻为梦想而战！！
3楼2014-06-02 09:12:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BioChen

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hailey at 2014-06-02 09:12:30
嗯嗯。。。是有高表达的，可以查到相关文献的，今天准备加10* GC  enhanger 试试.....

之前的回答，打错字了，囧
是cDNA质量不高
赞一下 回复此楼
4楼2014-06-02 09:19:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭