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zep616745243银虫 (小有名气)
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大肠杆菌超声破碎问题，欢迎大神前来探讨 已有4人参与
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| 近期做原核表达，BL21（DE3）菌株，取5ml菌液离心，PBS重悬3次，最后加1mlPBS重悬进行超声破碎，120W，超3s，停10s，冰浴。空载体菌超声2min（即40个循环）即可完全澄清，但离心可见黑色沉淀（一部分是），而超声重组载体菌时 超2min多，菌液还是有些不澄清（和空载体菌相比，浑浊度较大），离心看到较多的黑色沉淀。据说这是超过的结果，那么是不是说我的超声已经完全了？另外我想知道一下，相同超声条件下，若空载体菌破碎完全，那么重组载体菌是否也应该是超声完全的？欢迎大神不吝赐教！ |
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【答案】应助回帖
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zep616745243: 金币+3, ★★★很有帮助, 恩，我再摸索一下条件，谢谢 2014-06-06 19:32:28
zep616745243: 金币+3, ★★★很有帮助, 恩，我再摸索一下条件，谢谢 2014-06-06 19:32:28
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菌体量没有太大差异的情况下（可通过测OD确认），重组载体菌沉淀变多，最大的可能是重组蛋白有表达，并且主要是在包涵体中，超声完后离心，分别取上清和沉淀样品跑一下SDS-PAGE看一下就清楚了。 而沉淀发黑，最大可能就是超过了，你的程序参数除功率外没有太大问题，就是循环次数可能略多，5ml菌液不用超那么多次，建议减少循环次数，略微调低功率，冰浴时在冰块中加水，冰水浴效果更好。 此外，只要菌株一样，同样超声程序的效果是一致的。 |
7楼2014-06-06 09:04:47
2楼2014-06-01 07:38:59
zep616745243
银虫 (小有名气)
- 应助: 32 (小学生)
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- 性别: GG
- 专业: 兽医传染病学
3楼2014-06-03 08:46:19
4楼2014-06-04 22:29:18
