24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 8791  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zep616745243

银虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌超声破碎问题,欢迎大神前来探讨 已有4人参与

近期做原核表达,BL21(DE3)菌株,取5ml菌液离心,PBS重悬3次,最后加1mlPBS重悬进行超声破碎,120W,超3s,停10s,冰浴。空载体菌超声2min(即40个循环)即可完全澄清,但离心可见黑色沉淀(一部分是),而超声重组载体菌时 超2min多,菌液还是有些不澄清(和空载体菌相比,浑浊度较大),离心看到较多的黑色沉淀。据说这是超过的结果,那么是不是说我的超声已经完全了?另外我想知道一下,相同超声条件下,若空载体菌破碎完全,那么重组载体菌是否也应该是超声完全的?欢迎大神不吝赐教!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

只有不断地失败才会成功
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

对照空载体菌株和你的表达菌株在超声破碎的时候应该是一致的,至于混浊,可能是蛋白的原因
5楼2014-06-05 05:33:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

79377

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zep616745243(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-01 13:02:39
zep616745243: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-06-03 08:44:18
黑色沉淀据说是超声破碎仪的探头上脱落的铁屑,肯定是破碎完全了,有时候破碎后很混浊有可能是你的目的蛋白表达了且无法溶于你的缓冲体系中所致

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-06-01 07:38:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zep616745243

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 79377 at 2014-06-01 07:38:59
黑色沉淀据说是超声破碎仪的探头上脱落的铁屑,肯定是破碎完全了,有时候破碎后很混浊有可能是你的目的蛋白表达了且无法溶于你的缓冲体系中所致

应该不是铁屑吧,探头应该都是不锈钢的,我用的是PBS缓冲液去超声的,不知道是不是这个原因
只有不断地失败才会成功
3楼2014-06-03 08:46:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

79377

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
zep616745243: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-06-06 19:32:53
引用回帖:
3楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-06-03 08:46:19
应该不是铁屑吧,探头应该都是不锈钢的,我用的是PBS缓冲液去超声的,不知道是不是这个原因...

举个例子吧,如果你表达的目的蛋白表达量很高或者对大肠自身有一定毒性进而形成了包涵体的话,你破碎细胞后就会很混浊,或者你的目的蛋白由于自身的性质而无法溶于PBS.也会出现你说的情况

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-06-04 22:29:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +8 zhubinhao 2026-03-27 8/400 2026-03-27 11:46 by Wushiqi17
[考研] 333求调剂 +3 question挽风 2026-03-23 3/150 2026-03-27 11:29 by 不吃魚的貓
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +7 丹青奶盖 2026-03-26 8/400 2026-03-27 11:24 by 丹青奶盖
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +3 辰沐5211314 2026-03-26 3/150 2026-03-27 10:24 by 尽舜尧1
[考研] 材料学硕333求调剂 +8 北道巷 2026-03-24 8/400 2026-03-27 10:18 by 我是小康
[考研] 359求调剂 +4 王了个楠 2026-03-25 4/200 2026-03-27 08:43 by 不吃魚的貓
[考研] 284求调剂 +11 junqihahaha 2026-03-26 12/600 2026-03-27 04:37 by wxiongid
[考研] 食品工程专硕求调剂 +3 小张zxy张 2026-03-26 3/150 2026-03-27 01:14 by dgnhs
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 寻找调剂 +5 倔强芒? 2026-03-21 8/400 2026-03-26 13:25 by 0906ljy
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 各位老师您好:本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生(材料、化学、电化学,环境) +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见