应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 实验讨论 » PCR 目的条带出不来
31/1返回列表
查看: 1106  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 博学EPI ，点击这里进行查看

chengyun5

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] PCR 目的条带出不来

我的目的片段是3000bp  左右  PCR体系是25ul
               上下游引物各0.5ul     
                模板 0.5ul
                双蒸水11ul
                Prime star  12.5ul
PCR条件 98℃  5min   预变性
              98℃   10s
              50℃   5s
              72℃   1min   72℃   10min  终延伸  电泳后条带如图，我试着改变了退火温度 55℃  60℃ 可是都不对

PCR  目的条带出不来
dd.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-05-23 10:43:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★
chengyun5: 金币+1, 博学EPI+1 2014-05-27 15:48:33
建议楼主做一个touchdown PCR
Tm从60降到50，试一下。
赞一下 回复此楼
人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-05-27 11:05:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elise1987

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

确定模版没问题，引物没合错？建议楼主搞个阳性对照在旁边排除一下，然后对pcr条件进行优化，如楼上所说降落伞PCR可以一试，极大限度排除非特异性扩增。另外也可以用梯度PCR仪筛选一下退火温度。还有，模版浓度过高也可能导致P不出来。个人感觉这是个很简单的反应。。。只要东西没用错。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
不折腾，不胡闹，珍惜时间和生命
3楼2014-07-07 22:15:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chengyun5 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭