| 查看: 3240 | 回复: 3 | |||
love犬夜叉木虫 (小有名气)
|
[求助]
测序结果引物部分跟原本应该的序列相比少个碱基，是引物的问题还是连接过程中丢失？ 已有1人参与
|
| 我一段基因序列在一头一尾各加上一个酶切位点，然后设计的引物做PCR，然后连接到19T载体后测序，两次测序结果都显示在尾部的酶切识别位点少一个T碱基，请问下这是因为引物在合成时就少了一个T，还是在PCR过程中丢失了一个T？我还要继续做下去么？（酶切下来练到表达载体上？）还是重新做一次PCR，再连接测序？ |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有83人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 测序回来，序列中找不到下游引物，求救啊。。。。。
已经有19人回复
- 找到一对细菌的通用引物，大家看下为什么会有简并碱基
已经有9人回复
- 如何通过设计引物，插入三个新的DNA碱基
已经有4人回复
- 测序结果中不到引物
已经有5人回复
- PCR引物必须与目的基因片段的一小段序列互补吗？急！！！
已经有9人回复
- 测序结果出现单碱基的重叠峰
已经有6人回复
- 急！PCR产物测序找不到引物
已经有17人回复
- 上游引物和下游引物的碱基数目要一样多么？
已经有5人回复
- 构建载体测序，老在引物区段发生相同的错误，模版有突变？
已经有22人回复
- 两次测序结果差几个碱基可以吗？
已经有5人回复
- 如果引物中间有3个碱基不配对的，还可以扩出来吗
已经有5人回复
- 引物设计3‘端最后一个碱基的讨论
已经有13人回复
- 简并引物需要加保护碱基吗
已经有7人回复
- 测序得到的结果不对，不知道是比对错误，还是其他什么问题？？？
已经有3人回复
- 求助： 已知引物的碱基序列，如何计算引物的长度？
已经有11人回复
- 求助：PCR扩增片段测序结果引物中间多出150bp的片段
已经有5人回复
- 为何PCR产物测序只测一部分？
已经有9人回复
- 测序结果发现，在引物位置多了一位碱基，是什么原因引起的？
已经有16人回复
- 测序结果显示多了一个碱基，峰图上正常，请问什么原因？谢谢
已经有8人回复
- 设计的引物错了一个碱基对后续试验影响大吗？
已经有6人回复
- 测序后的DNA序列与预测的有几个碱基不同，怎么办
已经有18人回复
- 【求助/交流】PCR结果碱基缺失
已经有4人回复
- 【求助/交流】测序时，为什么测序结果是与目的碱基序列 反向互补的序列呢？
已经有6人回复
- 【求助/交流】测序后发现pcr产物中碱基错配。原因？
已经有5人回复
- 【求助/交流】问个问题,测PCR产物序列的时候会不会测出引物的序列?
已经有16人回复
- 测序关于碱基的确定
已经有7人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
love犬夜叉(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-05-24 22:52:51
感谢参与，应助指数 +1
love犬夜叉(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-05-24 22:52:51
|
酶切，能切下来就是正确的。测序数据前面20个左右的碱基和800以后的碱基可信度不是太高，如果出错在这些区域重新选择测序引物。 PS： Sanger法测序，在测序反应结束后，需要进行乙醇纯化的步骤，一般30bp以内的小片段会丢失，所以所得测序数据的起始碱基是测序引物后30bp以外的序列。当用PCR引物作为测序引物时，测序结果中是不包含引物序列的。若希望得到引物序列，可通过以下两种方法：① 对于长度<800bp的PCR产物，可用另一端的引物进行测序，所得序列的末端就包含引物的反向互补序列。② 对于较长的序列，一个测序反应无法测通，可通过将PCR产物片段克隆到适当的载体，用载体上的通用引物进行测序。由于载体上的通用引物与插入序列之间还有一段距离，因此可以获得完整的PCR引物序列。另外，测序起始端的碱基容易发生误读，若您希望获得PCR产物的完整序列，建议克隆后再测序。 |
2楼2014-05-23 08:39:07
love犬夜叉
木虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1526.6
- 散金: 200
- 红花: 1
- 帖子: 85
- 在线: 27.2小时
- 虫号: 2838266
- 注册: 2013-11-30
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2014-05-24 16:23:41
4楼2014-05-24 19:01:12
