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静mo2010

银虫 (正式写手)

[求助] 单克隆长不出来啊。。求助大神! 已有1人参与

我做双酶切,EcoRI和PstI,载体有7.3kb,第一次做的时候,缓冲液是EcoRI专用的buffer20微升的体系载体0.5微克,内切酶分别是1微升,切过夜,目的片段也是一样。第二次做的时候,载体切8h,目的片段克隆一点都没有长,可以排除的因素有:抗生素平板没问题,转化操作没问题,感受态没问题,酶切后胶回收没问题。但是酶切过程我不能确定有没有问题,因为跑出来的片段,有的时候会有好几条,但是只有一条的酶切产物的时候也没有做出来。。。

单克隆长不出来啊。。求助大神!
EcoRI&PstI双酶切载体pgbkt7-5.10(1).jpg
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kingoff999

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

星号活性原因? 所以你回收的不是目的片段?
2楼2014-05-26 09:18:47
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