应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pPIC9表达质粒XhoI/EcoRI双酶切
51/1返回列表
查看: 3497  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sweet561

银虫 (小有名气)

[求助] pPIC9表达质粒XhoI/EcoRI双酶切 已有2人参与

请问一下，我现在做pPIC9表达质粒构建，连上200bp目的片段，并做了PCR和测序鉴定，都是正确的。但现在用XhoI和EcoRI双酶切，除了切出pPIC9、200bp的目的条带外，在1000-2000bp处还有一条弱弱的条带，不知道是怎么回事，我已经检查了质粒里都分别只有一个XhoI和EcoRI的酶切位点，那这个表达质粒算是构建成功了吗，直接线性化做表达的话会有什么影响吗？请各位高手指点。谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-05-19 10:23:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sweet561 at 2014-05-20 16:49:25
谢谢！只是我还要换酶切位点，再将目的基因转到pPIC9K里，之后pPIC9K-目的基因，也是用PCR、测序验证没问题，就是双酶切有另外一条非特异条带，是酶切酶连，而且是通用引物，就是害怕之后直接线性化会有问题。...

pPIC9K上的xhoI可不是一个酶切位点。多克隆位点内和多克隆位点上游都存在一个XhoI酶切位点，如果你构建出来的9K用ECoRI和XHOI切出来3条带很正常。不用担心，线性化后做一下检测，只要大小正确没啥问题。
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
5楼2014-05-20 19:37:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

rv1nm2y

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不放心的话测序看看。
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-19 16:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是酶切酶连构建的重组质粒还是反向PCR构建的？你测序是用的通用引物还是自己的引物？如果是酶切酶连，测序用的通用引物那就没啥问题，杂带是酶切条件不好导致的非特异切割，不影响你的线性化。
还有pPIC9和你的基因大小差别太大，做双酶切验证效果很差，既然有PCR和测序验证，就不需要做酶切验证了。
赞一下(1人) 回复此楼
大家相互帮助哈
3楼2014-05-19 20:19:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sweet561

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-05-19 20:19:27
是酶切酶连构建的重组质粒还是反向PCR构建的？你测序是用的通用引物还是自己的引物？如果是酶切酶连，测序用的通用引物那就没啥问题，杂带是酶切条件不好导致的非特异切割，不影响你的线性化。
还有pPIC9和你的基因 ...

谢谢！只是我还要换酶切位点，再将目的基因转到pPIC9K里，之后pPIC9K-目的基因，也是用PCR、测序验证没问题，就是双酶切有另外一条非特异条带，是酶切酶连，而且是通用引物，就是害怕之后直接线性化会有问题。
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-20 16:49:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854求调剂 +18 门路摸摸 2026-04-15 20/1000 2026-04-16 14:40 by dingyanbo1
[考研] 0854调剂 +9 950824he@ 2026-04-09 9/450 2026-04-16 11:11 by noqvsozv
[考研] 通信工程求调剂！！！ +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 药学求调剂 +11 RussHu 2026-04-12 13/650 2026-04-15 19:07 by zhuwenxu
[考研] 22专硕求调剂 +9 haoyun上岸 2026-04-11 11/550 2026-04-15 14:47 by elainzaizai
[考研] 366求调剂 +11 不知名的小卅 2026-04-11 11/550 2026-04-14 15:50 by zs92450
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +16 李木子啊哈哈 2026-04-12 17/850 2026-04-14 09:11 by fenglj492
[考研] 293求调剂 +16 我爱高数高数爱� 2026-04-12 18/900 2026-04-13 21:47 by 学员JpLReM
[考研] B区0809 ，数一英一，290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 302求调剂 +10 易！? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385，求调剂 +8 Ezra_Zhang 2026-04-09 8/400 2026-04-11 09:15 by 猪会飞
[考研] 337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 08:57 by zhq0425
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 22:23 by 286640313
[考研] 309求调剂 +14 wdhw 2026-04-10 15/750 2026-04-10 21:06 by zhouxiaoyu
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 一志愿京区985，085401电子信息，本科电子信息 +3 阳光开朗的男孩 2026-04-10 3/150 2026-04-10 16:29 by sophia_93
[考研] 一志愿沪9，326生物学求相关专业调剂 +4 刘墨墨 2026-04-09 4/200 2026-04-10 12:07 by pengliang8036
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭