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忘记将来

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR实验 求助 已有4人参与

刚刚学习做荧光定量PCR,虫虫们用 那个公司的荧光定量mix的多?
做标准曲线的 溶度已知的DNA 是什么?买的试剂盒吗?标准曲线是 每次试验都要做一次吗?
做荧光定量的模板必须是cDNA吗、?
大咖们给出来指导一下呀,不胜感激!
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回帖置顶 ( 共有2个 )

忘记将来

木虫 (正式写手)

忘记将来: 回帖置顶 2014-05-16 14:18:20
追问二:在设计TaqMAN探针时,如何选择5‘报告集团和3’淬灭集团,来设计出背景低的探针?有什么经验或者好的方法分享吗??????
7楼2014-05-16 14:18:12
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忘记将来

木虫 (正式写手)

忘记将来: 回帖置顶 2014-05-16 14:20:49
追问三:如何选择 定量方法用 相对定量还是绝对定量? SYBR Green法还是TaqMAN探针法?前者的选择和后者有对应关系吗?
8楼2014-05-16 14:20:41
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

OmicsLink

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
忘记将来(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-05-19 20:27:01
忘记将来: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢! 2014-05-20 11:12:40
1)试剂方面,推荐美国GeneCopoeia的All-in-One™系列,从RNA抽提到检测,很全,照着说明书操作就行了,有问题找技术支持,价格还行,这家试剂是基于SYBR Green 1 染料法研发的。
2)严格来讲如果实验条件不一样,那么都应该做标准曲线。
3)做荧光定量的模板取决于你要检测什么,检测总DNA的拷贝数使用DNA,检测某基因的表达水平使用cDNA.
4)绝对定量的目的是测定目的基因在样本中的分子数目,即通常所说的拷贝数。相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例,而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数。
希望我的回答能帮助你。
一切有为法,如露如闪电
12楼2014-05-19 11:33:21
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 忘记将来 at 2014-05-16 13:04:57
我看了一些资料说标准品是原待测基因序列,这个要专门合成吗?又如何确定其拷贝数呢?
本人菜鸟刚刚学习入门,不要嘲笑我问这么低级的问题,嘿嘿!...

标准品一般用质粒,算分子量,再测质粒浓度,可以计算拷贝数。
9楼2014-05-16 15:49:44
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普通回帖

忘记将来

木虫 (正式写手)

追问:哪个公司的荧光定量PCR仪好用?性价比较高
2楼2014-05-15 16:39:12
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忘记将来

木虫 (正式写手)

没有人围观呢自己顶一下
3楼2014-05-16 08:28:17
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cornell-grad

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
忘记将来: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢! 这款仪器的价格大概多少呀? 2014-05-16 13:01:02
ABI 7500 fast system
4楼2014-05-16 09:39:33
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
忘记将来: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢! 请问ABI和BioRad的报价分别在多少? 2014-05-16 13:02:06
仪器:ABI的最好,BioRad的便宜些
试剂:Thermo之类的公司
模板必须是DNA
定量分2种:绝对定量和相对定量。对于绝对定量,标准品的模板拷贝数是已知的,而且模板长度和测试样品的模板长度最好接近,保证扩增效率一致。
标准曲线最好每批次都做,保证标准品和样品在同样条件下PCR。
5楼2014-05-16 10:25:43
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忘记将来

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-16 10:25:43
仪器:ABI的最好,BioRad的便宜些
试剂:Thermo之类的公司
模板必须是DNA
定量分2种:绝对定量和相对定量。对于绝对定量,标准品的模板拷贝数是已知的,而且模板长度和测试样品的模板长度最好接近,保证扩增效率 ...

我看了一些资料说标准品是原待测基因序列,这个要专门合成吗?又如何确定其拷贝数呢?
本人菜鸟刚刚学习入门,不要嘲笑我问这么低级的问题,嘿嘿!
6楼2014-05-16 13:04:57
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

报价不知道
10楼2014-05-16 15:50:35
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