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做高效液相色谱要注意哪些 已有4人参与
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做了快一个月的液相了，不知道为啥同一个样品进两次样有时峰面积差别好大，，做标准曲线时也是 今天偶尔和另一做标准曲线的同学交流，她说流动相每次最少要超声15min,标样也要过膜，我表示每次超声几分钟就拎起来了，标样更没过膜 瞬间崩溃呀，做了这么久液相，白搭了？？  ~~~~(>_< ~~~~ 各位前辈液相经验丰富的有啥经验提点提点啊，跪求 |
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3楼2014-05-14 10:30:12
woshilong12
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【答案】应助回帖
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xuweimbf: 金币+1, 积极应助 2014-05-14 08:12:52
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xuweimbf: 金币+1, 积极应助 2014-05-14 08:12:52
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样品肯定要过膜，这是为了防止堵塞色谱柱，另外流动相超生是为了出去流动相里面的空气，如果是现在比较新的液相色谱的话，应该不用超生就可以的，但是如果是以前比较旧的液相色谱建议还是超生15到20分钟吧，你没有超生那么长时间应该问题也不大。同一个样品进两次峰面积不同有可能是样品是不是放置了一段时间，试着看一下平行样的峰面积怎么样；还有就是是不是时间太短了，有部分样品没有完全走出来，建议两个样品之间走一个空针试一下；最后还有可能就是仪器的问题了，因为我们老师强调最后怀疑仪器 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
2楼2014-05-13 23:18:19
fayfeifei
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【答案】应助回帖
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关于流动相超声，主要目的是为了脱气，所以如果你的系统里没有气泡，这个问题排除。 关于样品过膜，主要目的是为了保护进样口和色谱柱，以免不溶颗粒损伤机器。但基本上这个对你出峰面积没有影响。 如果你的问题主要集中在同一样品出现很大差别的峰面积的情况，你可以考虑以下几点： 1 如果是手动进样，那样确保自己的进样手法稳定；如果是机器进样，那么要排查一下系统进样器是否有故障。 2 另一种可能是你的峰型不完美，或杂峰太多，导致机器自动积分有误差。比如基线可能不平，有时候自动积分的时候把别的小峰也算进去了。 3 也可能是流动相并不能完全将样品峰洗脱下来，导致有时候出的多有时候出的少，结果不稳定。 暂时想到这些可能，你可以一一排查。 |
4楼2014-05-15 09:14:36
ABCzero
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5楼2014-05-15 22:00:42
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