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酶切后跑出的条带这个样子，是酶的问题吗 已有3人参与
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一直在做克隆，好几个月了还没做出来，累觉不爱了！我先前用的内切酶是TAKARA的sfi-1 ，快速酶，说50度5分钟就能酶切完全，做了好多次，刚开始也不太明白，跑了胶一条带，以为是酶切完全了，接着做，一直是失败失败失败。。。。。。现在索性酶切过夜，出现了两条带，可是与sal 1 酶切的条带有很大区别，位置差的好远。近几天又切了一次，条带也很奇怪，望各位大神指点迷津，给我点头绪啊 第一张图片是酶切验证，左边的是sal1 切的，右边的是sfi-1切的；第二张图片是sfi-1切的  2014 4 25 pcr yz_副本.jpg  2014 5 2 meiqiehuishou_副本.jpg |
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luwei13566
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
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LZ是切的什么？基因，载体，重组质粒？用单酶切的话除非你的模板上有额外的切割位点，一般都是切出来一条带的，LZ切出来两条带本来就已经出问题了。~首先你需要筛查下你的模板上有没有额外切割位点，其次你用快切酶过夜也不对，很容易切花。 TAKARA的快切酶你可以试试37度切割，先切60min，可以拿一个带有sfi-1的质粒做对照，质粒能切开就没问题，模板添加1——2ug。 另外，LZ为什么要用单酶切克隆呢，还是buffer不兼容分步酶切？ |
2楼2014-05-12 14:42:49
3楼2014-05-13 10:56:29
luwei13566
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