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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 过表达某分子后细胞变多，但是konckdown 某分子后细胞没有变少
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HUANGYITONG

新虫 (初入文坛)

[求助] 过表达某分子后细胞变多，但是konckdown 某分子后细胞没有变少 已有1人参与

本人在肺癌细胞中，过表达 某分子后细胞变多，但是konckdown 某分子后细胞没有变少，基本没有变化。过表达和konckdown 该分子后均发现抑制凋亡的基因Mcl1,Bcl2,Bclw.Bclxl下调，但是促进凋亡的基因BAK没有上调，但是流式检测细胞凋亡没有显著地差异。除此之外，过表达和konckdown 该分子后细胞周期也没有显著地变化，只有c-Myc过表达后上调，konckdown后下调。但是过表达和konckdown 该分子后CyclinB1 均上调，CyclinD1均下调，p21均下调，其余与细胞周期相关的关键分子没有变化。请各位前辈帮忙分析一下这是什么机制。不胜感激

[ Last edited by silicare on 2014-5-12 at 08:01 ]
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1楼 2014-05-08 14:32:27
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gyesang

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【答案】应助回帖

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HUANGYITONG(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-10 08:32:13
1. 过表达某分子后细胞变多
细胞变多的定量手段是什么？

2. 但是konckdown 某分子后细胞没有变少
Konckdown的方法是什么，siRNA，shRNA，shmirRNA？knockdown的效率如何，如何定的量？Western blot还是realtime PCR

先回答出这两个问题
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2楼2014-05-08 14:51:06
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silicare

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3楼2014-05-12 08:02:09
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HUANGYITONG

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by silicare at 2014-05-12 08:02:09
下次注意标题

谢谢提醒  初次发帖没有经验  望见谅
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4楼2014-05-12 14:44:42
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HUANGYITONG

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 14:51:06
1. 过表达某分子后细胞变多
细胞变多的定量手段是什么？

2. 但是konckdown 某分子后细胞没有变少
Konckdown的方法是什么，siRNA，shRNA，shmirRNA？knockdown的效率如何，如何定的量？Western blot还是realtim ...

1.细胞变多的定量手段是CCK-8检测，变化虽然不明显，但是有趋势
2.Konckdown的方法是shRNA，knockdown和过表达的效率都很好，检测时用了realtime PCR和Western blot。均有明显的效果，这一点我很肯定
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5楼2014-05-12 14:47:26
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
HUANGYITONG: 金币+1, ★有帮助 2014-05-12 15:50:16
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励热心回帖交流 2014-05-12 18:04:42
引用回帖:
5楼: Originally posted by HUANGYITONG at 2014-05-12 14:47:26
1.细胞变多的定量手段是CCK-8检测，变化虽然不明显，但是有趋势
2.Konckdown的方法是shRNA，knockdown和过表达的效率都很好，检测时用了realtime PCR和Western blot。均有明显的效果，这一点我很肯定...

1.细胞变多的定量手段是CCK-8检测，变化虽然不明显，但是有趋势
a. CCK-8检测的是细胞活力，不是细胞增殖；
b. 变化既然不明显，所以你后面做的那些没有上调下调，变化不明显也很正常
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6楼2014-05-12 15:17:44
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HUANGYITONG

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-12 15:17:44
1.细胞变多的定量手段是CCK-8检测，变化虽然不明显，但是有趋势
a. CCK-8检测的是细胞活力，不是细胞增殖；
b. 变化既然不明显，所以你后面做的那些没有上调下调，变化不明显也很正常...

如果显微镜下观察细胞变多，但是CCK8检测变化不明显，有可能是哪些原因呢
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7楼2014-05-12 15:49:52
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HUANGYITONG

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-12 15:17:44
1.细胞变多的定量手段是CCK-8检测，变化虽然不明显，但是有趋势
a. CCK-8检测的是细胞活力，不是细胞增殖；
b. 变化既然不明显，所以你后面做的那些没有上调下调，变化不明显也很正常...

我现在是细胞凋亡和增殖现象不明显，但是过表达和konckdown后的c-myc，CyclinB,CyclinE， P21等变化都很明显，所以我很困惑，不能确定到底要不要继续做下去
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8楼2014-05-12 15:53:10
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