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llscool

金虫 (小有名气)

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[求助] 求助内毒素干扰实验相关问题已有2人参与

1、药典中规定使用“未检出内毒素的样品”做干扰实验？都没做干扰实验，怎么确保我的样品符合这要求呢？
2、预实验中，假如在10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml都无干扰，可否为保险起见在后面的干扰实验中选择5mg/ml浓度去做？我想是可以，只要不超过MVC就行，因为以后检测时候还是会用到低于5mg/ml的，在5mg/ml时候无干扰，那浓度更低时候应该也无干扰，但药典提到一个找出“最大无干扰浓度”的概念，我就迷糊了
3、内毒素干扰实验，假如预干扰实验中发现最大不干扰浓度为5mg/ml，鲎试剂灵敏度0.25，那干扰实验中供试品阳性组是用“0.5ml 0.5EU/ml内毒素标准品+0.5ml 5mg/ml供试品” 配制成0.25的供试品对照还是 “0.5ml 0.5EU/ml+0.5ml 10mg/ml供试品”，看标准规程的意思是先配置成5mg/ml的供试品然后稀释内毒素对照品就行，属于前面那个方法？这个我感觉如果是前面那个方法，混合后供试品的浓度应该变成了2.5mg/ml，那实验有效也应该是证明2.5mg/ml下无干扰吧？后面那混合方法做的才能说明在5mg/ml供试品无干扰吧？还是我哪理解错了？
4、各位前辈对一个新手做这个有什么建议吗？

由于以前都没接触过内毒素，刚开始做这个，很多不懂得，提出这些问题，大家见笑了。

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1楼2014-04-27 22:57:11

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农场小猪

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
llscool: 金币+7, ★★★★★最佳答案, 这个比较详细有帮助 2014-04-28 19:40:57

1.内毒素首先算你的限度，定制你的限度，如果注射剂考虑联合用药，你的限度还要放1/2到1/3.这都是药典上的。
2.楼主不知道你的限度时多少，但就你给的数据看，10mg/ml都无干扰，你这药限度好低哦，按0.25的来做限度就0.025啊，你首先限度不能弄错，选用中间浓度为你的干扰实验浓度和以后的检测浓度本身没有问题，但是不知道这么浓度和你计算的最小稀释浓度差多少，如果差值很大，我觉得你的的实验本身可能就有问题，你以限度和各灵敏度下计算出的各稀释倍数下溶液，其干扰预实验的无干扰浓度应该和你的最小稀释浓度不可能差太多的。
3.楼主的第3个问题就是完全理解错了。干扰实验不是只做一个浓度。看药典
例子。就你的例子浓度5mg/ml.鲎试剂灵敏度0.25EU的。
那么你干扰实验做的是0.25λ-2λ这么个范围，也就是要做0.06EU-0.5EU这么个范围
2λ5mg/ml的供阳就是=4λ的溶液+同体积的10Mg/mld的样品液配置的
1λ5mg/ml的供阳就是=2λ的溶液+同体积的10Mg/mld的样品液配置的
以此内推。
我个人觉得楼主你要把药典和操作规程仔细看才行。不复杂，是你自己没有看明白。