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snmrna

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] TA克隆老是失败,求高人解惑 已有5人参与

我用takara ex taq酶扩增的目的片段,条带大小ok;连接的pUC-T上,再转入E.coli DH5α中,蓝白斑筛选,多数是白色的,挑取单菌落培养5个小时,做菌落PCR(用的是目的基因扩增的引物),结果大部分都有目的条带,于是将它们送去测序。测序见‘结果1’,上面三个样品很好理解为是载体自连的结果,克隆位点后面的序列与载体上相应的位置是一致的;但是下面两个样品克隆位点后面的序列是与载体670-1500左右的序列一致,这该怎么解释呢?

TA克隆老是失败,求高人解惑
结果1.jpg
TA克隆老是失败,求高人解惑-1
结果2.jpg
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永远不知道

至尊木虫 (著名写手)

金花家族创始人

引用回帖:
14楼: Originally posted by snmrna at 2014-04-25 13:44:38
哦,我知道这个结果肯定是失败了,只是好奇这个‘自连’怎么会是这样,或者不是自连,是别的什么...

自连就是载体自连上了,这个你需要弄清楚TA克隆的原理,就是载体切开后和目的片段上的T或者A链接,不知道对不对哈,我是这么想的
15楼2014-04-25 19:16:43
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查看全部 18 个回答

jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2014-04-23 23:56:29
是不是 感觉自己的目标条带 有一部分转进去了,但是不是全部都进去了? 我也碰到过这些,重新做吧
借口很贱,,,
2楼2014-04-21 17:04:14
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snmrna

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jonew at 2014-04-21 17:04:14
是不是 感觉自己的目标条带 有一部分转进去了,但是不是全部都进去了? 我也碰到过这些,重新做吧

感觉目标条带被置换掉了
3楼2014-04-21 18:18:32
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-23 23:56:39
你的分析策略选的不是很好,测序回来的序列,用软件去除中间的间隔,复制到word里面,用搜索功能搜索你的引物,去掉非目的序列,再做多序列比对。

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-04-21 18:26:46
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