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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » TA克隆老是失败，求高人解惑
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snmrna

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] TA克隆老是失败，求高人解惑 已有5人参与

我用takara ex taq酶扩增的目的片段，条带大小ok；连接的pUC-T上，再转入E.coli DH5α中，蓝白斑筛选，多数是白色的，挑取单菌落培养5个小时，做菌落PCR(用的是目的基因扩增的引物)，结果大部分都有目的条带，于是将它们送去测序。测序见‘结果1’，上面三个样品很好理解为是载体自连的结果，克隆位点后面的序列与载体上相应的位置是一致的；但是下面两个样品克隆位点后面的序列是与载体670-1500左右的序列一致，这该怎么解释呢？

TA克隆老是失败，求高人解惑
结果1.jpg
TA克隆老是失败，求高人解惑-1
结果2.jpg
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1楼 2014-04-21 11:18:25
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snmrna

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-24 06:41:28
你测序的是空载体，送的克隆不对
...

我知道这个载体上没有连接上目的片段 但是为什么跟载体自连的序列会差了200bp呢
赞一下 回复此楼
10楼2014-04-24 17:24:58
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jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-04-23 23:56:29
是不是 感觉自己的目标条带 有一部分转进去了，但是不是全部都进去了？ 我也碰到过这些，重新做吧
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借口很贱，，，
2楼2014-04-21 17:04:14
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snmrna

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jonew at 2014-04-21 17:04:14
是不是 感觉自己的目标条带 有一部分转进去了，但是不是全部都进去了？ 我也碰到过这些，重新做吧

感觉目标条带被置换掉了
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-21 18:18:32
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-23 23:56:39
你的分析策略选的不是很好，测序回来的序列，用软件去除中间的间隔，复制到word里面，用搜索功能搜索你的引物，去掉非目的序列，再做多序列比对。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(3人) 回复此楼
4楼2014-04-21 18:26:46
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