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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何确定自己的目的片段 PCR 痛苦中
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

[求助] 如何确定自己的目的片段 PCR 痛苦中 已有7人参与

最近做PCR  条带总是不请楚，第一次做，然后有为老师帮我设置了不同降火温度，出来好多片段。。
我怎么才能知道哪个是我的目的片段呢。。我怎么才能知道我的目的序列呢。。。。帮忙解释一下 各位i
谢谢  痛苦中
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有点矛盾。有点纠结
1楼 2014-04-20 19:04:10
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

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11楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-04-21 17:19:28
ITS fragment
(ITS1 + 5.8 + ITS2) is about 550-850 bp.这是我目的片段的名称吗？...

对。
看看its的说明吧：
http://en.wikipedia.org/wiki/Internal_transcribed_spacer
先搞懂你要做的是什么实验。然后才会知道要怎么做实验。
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12楼2014-04-21 18:21:05
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ljhzyy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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wanglixia815(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-21 08:41:52
你好，你PCR之前应该提前知道自己的目的片段大小有多大吧 根据你的目的片段的大小选择合适的marker 关于很多杂带 说明你的退火温度太低了 你需要提高一点退火温度
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2楼2014-04-20 19:18:57
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ljhzyy at 2014-04-20 19:18:57
你好，你PCR之前应该提前知道自己的目的片段大小有多大吧 根据你的目的片段的大小选择合适的marker 关于很多杂带 说明你的退火温度太低了 你需要提高一点退火温度

恩，我的目的片段大小应该是600-800bp...我买了两个marker一个是10-1000  一个是10-1500.。。。同一个样设着了不同的退火温度之后。。做出来的片段大小也不一样把？那我怎么知道那个温度的片段是我想要的呢？
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有点矛盾。有点纠结
3楼2014-04-20 22:03:12
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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wanglixia815(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-21 08:42:05
首先你要找到你的目的基因吧，NCBI里面找下或者参考文献之类，引物序列你总有吧，用PRIMER5截一下不就大概知道你的目的片段时多大了
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我就是我
4楼2014-04-20 22:05:09
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