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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 空质粒双酶切出现非常相近的两条带？转化长满板？
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水墨蓝

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 落落_无尘 at 2014-04-17 21:37:17
这个不是序列的问题，我的意思是说首先是MCS的酶切位点之间碱基数目少，两个酶不容易同时靠近，所以可能部分就没有切出两个位点来，这部分就算单酶切，另一部分可以这个酶切完了那个酶再去切。单酶切只是断开化学键 ...

我同时切了4个载体，有的载体单酶切是一条带，有的是2条带，不过2条带很相近，跟双酶切出现的现象差不多
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21楼2014-04-18 10:36:21
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
水墨蓝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-18 12:34:03
首先，做两个单酶切试试，切开了就一条细细的带，要是没问题，少切点质粒试试，这东西切多了不是好事

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22楼2014-04-18 11:03:03
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水墨蓝

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-18 11:03:03
首先，做两个单酶切试试，切开了就一条细细的带，要是没问题，少切点质粒试试，这东西切多了不是好事

我同时切了4个载体，其中3个是pet系列的，另外一个是PGEX的 pet的转化后疯长，PGEX就一点不长  已验证过抗性都没问题  4个载体单酶切的时候有的会出现非常相近的2条带 我就在想是不是载体切得有问题
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23楼2014-04-18 11:07:03
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凌枫miracle

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
酶切可能出问题了，看看酶是否用对了？酶切体系及时间也多注意下。

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24楼2014-04-18 13:33:27
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