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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物，只有引物二聚体，，怎么办
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韩元富豪

金虫 (小有名气)

[求助] PCR产物，只有引物二聚体，，怎么办 已有10人参与

小妹已经做了多次基因组DNAＰＣＲ，每次扩增出来的只有引物二聚体，连目标条带都没有，我设置的pcr参数是：
F1:2ul
F2:2ul
DNA模板：2ul
PCR Mix:25ul
ddH2O:19ul
两条引物的Tm分别是70.7、64.4，我设的ＰＣＲ的Ｔｍ是60，扩增出来只有引物二聚体.又用60的退火温度做了一次，还是只有引物二聚体，怎么办
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1楼 2014-04-16 18:07:59
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
韩元富豪: 金币+1 2014-04-17 21:38:41
我感觉你还是从引物特异性分析，其次再筛选退火温度。退火温度不一定非得低于TM值5度以下，为什么不从较低的那个TM值开始呢？
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学习使你立于不败之地
5楼2014-04-16 20:15:54
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for5

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
韩元富豪(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-16 19:19:07
温度继续降，直到p出来为止。或者设一个touchdown的程序，设一个初始温度，一个降低温度以及一个终点温度

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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操蛋的XX
2楼2014-04-16 18:11:55
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userhung

禁虫 (文学泰斗)

木虫博士
帮顶，blessing, blessing, blessing ! ~~~
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4楼2014-04-16 18:47:31
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
韩元富豪: 金币+1 2014-04-17 21:38:54
引物特异性低些，做个梯度看看选择好的退火温度。
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hehe
6楼2014-04-16 20:38:03
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