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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » pET系列的质粒怎么提？？？
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kehope

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按照你的说法，试剂盒是没有问题。
问题出在你摇的菌上面。
可能你的菌长杂菌。或者细菌过多或者过少。

[ 发自小木虫客户端 ]
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11楼2014-04-16 00:18:38
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winner00lk

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PET系列质粒大部分都是严谨型，拷贝数较低，每个菌体本身携带的质粒个数较少，如果楼主需要大批量高浓度的话，可能需要大抽质粒后浓缩；PUC是高松弛型，拷贝数叫多，所以较容易提出浓度较高的质粒量。
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我从远方来，没带走一丝遗憾
12楼2014-04-16 10:52:50
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roomofxw

木虫 (正式写手)
加氯霉素长时间培养，然后提取
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13楼2014-04-16 13:58:30
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Raysaslan

金虫 (小有名气)
我随便说一声啊，我们用的不是碱裂解 是加溶菌酶 不知道有没有关系。
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好，加油。
14楼2014-04-16 21:00:42
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xiwangyuer

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

挑单菌落过夜培养，第二天1：20扩培（250mL锥形瓶装30-50mL LB培养基保证充足氧气，利于质粒扩增），约80-100分钟，OD600约0.4时加氯霉素（母液34mg/mL，终浓度170ug/mL），再培养8-12小时。我是这样做的。有效果，建议楼主试试。
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15楼2014-09-16 20:38:50
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