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kehope

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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按照你的说法,试剂盒是没有问题。
问题出在你摇的菌上面。
可能你的菌长杂菌。或者细菌过多或者过少。

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2014-04-16 00:18:38
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winner00lk

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PET系列质粒大部分都是严谨型,拷贝数较低,每个菌体本身携带的质粒个数较少,如果楼主需要大批量高浓度的话,可能需要大抽质粒后浓缩;PUC是高松弛型,拷贝数叫多,所以较容易提出浓度较高的质粒量。
我从远方来,没带走一丝遗憾
12楼2014-04-16 10:52:50
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roomofxw

木虫 (正式写手)

加氯霉素长时间培养,然后提取
13楼2014-04-16 13:58:30
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Raysaslan

金虫 (小有名气)

我随便说一声啊,我们用的不是碱裂解 是加溶菌酶 不知道有没有关系。
好,加油。
14楼2014-04-16 21:00:42
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xiwangyuer

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

挑单菌落过夜培养,第二天1:20扩培(250mL锥形瓶装30-50mL LB培养基保证充足氧气,利于质粒扩增),约80-100分钟,OD600约0.4时加氯霉素(母液34mg/mL,终浓度170ug/mL),再培养8-12小时。我是这样做的。有效果,建议楼主试试。
15楼2014-09-16 20:38:50
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