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安小安4302

铁虫 (正式写手)

[求助] pET系列的质粒怎么提??? 已有10人参与

最近在提质粒,用生工试剂盒,但是pET这个载体提出的量很少,怎么办??增加了菌量还是不行,同时提的pUCm-T就很好。求大家给点意见!!!
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my1987

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
安小安4302(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励交流 2014-04-16 11:13:32
我以前遇到过一个情况,就是菌加多了,碱裂解不完全,量很低。加3ml基本提不出什么,加1ml反到提的很好,但是我那个是别的菌,氨苄抗性的,楼主考虑下这个情况吧!我提取pET28a时,摇菌一般就6-7小时,好像加3ml和1ml提出来的量没有差特别大,你摇了这么久会不会出现我上面说的情况。
10楼2014-04-15 09:26:00
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
安小安4302: 金币+2, ★有帮助, 在amp在板子上挑的菌呀,也是含amp的液体培养基做的呀 2014-04-14 21:04:25
是不是菌株出问题了,空载体提的也是这个结果吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-14 20:47:10
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
安小安4302: 金币+2, 谢谢 2014-04-14 21:03:18
看下质粒是松弛型的还是严整型的,有必要的话可以用10ml菌去提
操蛋的XX
3楼2014-04-14 20:48:47
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
安小安4302: 金币+2, ★有帮助, 就是用的碱裂解呀,要命了 2014-04-14 21:06:07
用分子克隆上的碱裂解法抽提的效果还是挺好的
4楼2014-04-14 20:56:01
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