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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] PCR产物做克隆,菌液涂平板后长得很慢是什么原因? 已有5人参与

各位大虾:我现在要把PCR产物做克隆,菌复壮后(37℃摇菌1h),4000rpm离心数秒,留下约300ul的菌液,吹打均匀,取20-30ul涂平板,37℃培养17h左右菌落还是比较小,而且菌落数量并不多,请问可能会是什么原因啊?
ps:我之前做克隆,到这一步,情况是菌落密密麻麻还很小,这次减少了涂平板的菌液量,菌落是少了,但还是长得那么慢。
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越努力越幸运
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-18 12:33:05
应该是导入时候的成功率不高导致。有次做克隆放在冰上,没处理好,结果冻住了,阳性克隆子很少,长的也很慢。
学习使你立于不败之地
3楼2014-04-14 17:32:17
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-14 17:24:31
柠檬可乐星: 金币+2 2014-04-15 16:12:17
这个应该跟感受态有关系。DH5a的感受态37度12小时左右就挺大的了,10小时就可以挑。
我一般做DH5a是菌复壮后(37℃摇菌40-50min),6000rpm离心数秒,留下约100ul的菌液,吹打均匀涂平板,37℃培养至长得比较大。一般为12小时。
2楼2014-04-14 17:10:26
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+1 2014-04-15 16:10:29
很可能是感受态出问题了,换了感受态再试试

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-04-14 18:18:15
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-04-14 17:10:26
这个应该跟感受态有关系。DH5a的感受态37度12小时左右就挺大的了,10小时就可以挑。
我一般做DH5a是菌复壮后(37℃摇菌40-50min),6000rpm离心数秒,留下约100ul的菌液,吹打均匀涂平板,37℃培养至长得比较大。一 ...

我跟你的操作是基本一样的 但是菌落长得比较小 后续实验倒是也能出结果  只是挑菌的时候 看着那么小 有些费劲
越努力越幸运
5楼2014-04-15 16:08:55
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