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082023071银虫 (小有名气)
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[求助]
请用过thrombin酶的前辈指导 已有1人参与
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想用thrombin酶切tag,酶切后的目的蛋白是要用来做蛋白结晶的，要求蛋白纯度比较高。 请问有人用过thrombin酶吗？ 用的什么公司的？酶切效率怎么样啊？酶切后纯化步骤怎样？ 我的目的蛋白大概18KD，中间没有thrombin酶切位点. 金币不多，意思下！ 谢谢！ |
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082023071
银虫 (小有名气)
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4楼2014-04-14 13:05:41
082023071
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2楼2014-04-14 11:28:47
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-14 11:41:59
082023071: 金币+5, ★★★很有帮助, 很有帮助 2014-04-14 13:06:27
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酶切效率同底物有很大关系，有的底物酶切位点序列有空间位阻啥的就切的比较慢 具体的效果你需要切一下看看 thrombin一般是37kDa，酶切之后你可以用分子筛分离你的蛋白和thrombin 如果你的Tag前面有Histag的话，会更好，将酶切后的蛋白液过Ni柱，穿透为目的蛋白加thrombin，tag和未完全切个的目的蛋白都在柱子上，然后再使用分子筛分离thrombin和目的蛋白。 用过Sigma的，是冻干粉，效果还不错 |
3楼2014-04-14 11:40:24
5楼2014-04-17 20:08:50