| 查看: 3534 | 回复: 7 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
内参基因筛选的问题 已有1人参与
|
||||
|
本人做的是一种药用真菌内参基因的筛选试验，该真菌只有菌丝和菌核两种形态，从菌丝接种到栽培料开始差不多110天能形成菌核。 现在看别人论文的试验设计，都是取不同组织或不同生长时期或不同的胁迫处理等等，然后取样测表达量，但是我的这个真菌内参基因筛选目前只定下来取不同时期的样品。而我的不同组织的话就只有菌丝和菌核。我后期的试验只要知道不同时期表达稳定的内参基因就可以满足了。 我想问的是别人的不同胁迫处理（比如低温，或高温）的依据是什么？和他们的后期试验有关系吗？ 求大神指点，金币有限，全部奉上 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生物学技术 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有97人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 我的拟南芥怎么不能正常生长
已经有15人回复
- 没有内参基因，还能做RT-PCR吗
已经有8人回复
- 已经得到目的基因的全长，现在要PCR将目的基因全长P出来，如何设计引物？谢谢
已经有12人回复
- real-time PCR 相对定量时 找不到内参基因 是不是就没法做？
已经有4人回复
- miRNA qPCR内参基因的选择
已经有15人回复
- Actin（内参基因）为什么叫Actin
已经有6人回复
- 荧光定量pcr,以及内参基因的选择。
已经有4人回复
- 关于qRT-PCR内参基因的验证
已经有10人回复
- 如何鉴定一个拟南芥完全未知的基因的功能
已经有10人回复
- 从基因文库中筛选到目的基因后的分析
已经有10人回复
- 7500如何计算扩增效率？
已经有5人回复
- qRTPCR内参基因是不是每次都要做
已经有10人回复
- 相对定量内参基因循环数的问题
已经有18人回复
- Realtime PCR 内参与目的基因问题
已经有11人回复
- 辣椒的内参基因
已经有5人回复
- 怎么筛选植物抗性基因
已经有10人回复
- 荧光素酶报告基因的内参质粒选择
已经有3人回复
- 【求助/交流】求拟南芥的内参基因!
已经有5人回复
- 【求助/交流】qRT-PCR
已经有16人回复
- 【求助/交流】拟南介都能导入一些什么基因啊？求高人总结一下。
已经有3人回复
- 【求助/交流】关于pcr内参b-actine的一个问题
已经有5人回复
3楼2014-04-13 08:28:22
biostar2009
专家顾问 (正式写手)
-
专家经验: +220 - MolEPI: 20
- 应助: 231 (大学生)
- 金币: 10391.9
- 散金: 387
- 红花: 63
- 帖子: 540
- 在线: 151.9小时
- 虫号: 2811882
- 注册: 2013-11-19
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
坏孩子、: 金币+1, ★有帮助 2014-04-12 21:39:15
坏孩子、(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-04-14 08:23:41
感谢参与，应助指数 +1
坏孩子、: 金币+1, ★有帮助 2014-04-12 21:39:15
坏孩子、(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-04-14 08:23:41
|
不是搞真菌的，直说内参基因的事情 内参基因从设定开始到现在，其实都是一个有些争议的问题 因为生命科学发展到现在，仍然基本上没有实现量化，没有一个绝对量的概念，所以比较表达量，必须依赖于一个恒定的基因。这一点，类似于化学早期对元素原子量的规定，大家都跟12C比，不然不可能统一。但是生命科学还远没有到这个水平，我们的”内参“，仅仅只是起到了归一化的作用，远远不能实现量化的统一。 但是恒定的基因几乎是不存在的，人们选择的一些常用的内参基因，基本理论是这些基因从转录到mRNA到蛋白，一路上没有太大的调控，他们就这样稳定的表达着。于是找到了一些结构性的基因，比如actin，tubulin，GAPDH，U6，5S rRNA，histone etc 其实这些基因仍然会变，在不同的背景下，或者不同的条件下，这些基因都会变化。 二代测序的出现为RNA量化，提供了一个新的视野。 比如做了RNA-seq，有的基因测得多，有的基因测得少，如何归一化？ 不用归一化！ 因为RNA-seq建库是不依赖于序列的克隆过程，可以认为这个过程对待所有的RNA都是平等的，最终测到多的，就可以认为表达量高，测得少的，就是表达量低。 然后人们再反过来看那些曾经选定的内参基因。 在RNA-seq数据中，经常就在变，根本不”恒定“。 所以我觉得在目前的大环境下，你再去选择一个新系统的内参基因，不妨做一次RNA-seq，在你选择的环境/因素/背景下，找那些变化不大的基因，再在这些基因中挑选相对比较”恒定“的基因。从高通量的角度出发，你会有更大的收货。 |
2楼2014-04-12 21:31:51
4楼2014-04-13 11:59:25
5楼2014-04-13 20:15:46
