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wanglixia815

新虫 (正式写手)

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专业: 土壤生态学

[求助] 已经快PCR折磨疯了。。救命呀已有11人参与

最近P出来的带总是很模糊。。。我的是要拿去的测序，第一次做，现在又有一个问题不懂。送去测序是送PCR products
还是需要什么切胶回收是什么意思？直接送PCR products 和为什么有的要切胶之回收之后再送啊。。有什么区别。。
请大神们解释一下。。

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有点矛盾。有点纠结

1楼 2014-04-09 20:07:33

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

whitewave

至尊木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

26楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-04-11 17:20:44
胶什么叫银然。。。我的胶就是加了一个叫gel red的东西。。1ul
他们跑的DNA模板还可以啊。。。
我用的是TBE 我的引物应该没有问题因为我之前用同样的引物在别的城市做过十个样是成功的。。。我昨天用的2%的胶 ...

我印象你的目标产物大概八百，我记得最佳应该百分之一左右的胶，百分之二的胶应该跑一百两百的短片段！当然最好你看分子克隆都写了！引物你还是要注意，如果你不是保存的干粉或者100的储存液在-20,20浓度的经常用放4度一个月没有问题，但是你反复-20,4度冻溶我的经验是不好，如果一周都做还是直接放4度，好几天不做再放-20！再多说句胶，水你可以多放5～10ml根本就没有事，如果你怕煮久了干。最后提醒下，有些试剂只能用TAE跑，TBE不能沉降产物。缓冲液要换，长期不换也不行，如果实验室有两种缓冲液的小心配胶和跑胶的不配套！我很是不明白，不是特别难扩增的产物为什那么多人都还说的传统的酶镁离子分开的，新手为什么不用预混的，只加水模板加预混试剂，不出错效果也好，难道我没有遇到真正高难扩的产物？还是买试剂都是七零前的老古董？

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