应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR条件，请指导。
51/1返回列表
查看: 1389  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ming0515

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] PCR条件，请指导。 已有4人参与

大家好，
最近进行PCR扩增，产物大小理论值为1580bp，用到的PCR条件为下列两种：
①94℃   5min；94℃   30s，55℃   30s，72℃   1.5min；72℃ 10min；
②94℃   5min；94℃   30s，55℃   1.5min，72℃   30s；72℃ 10min；

让人纠结的是用①正常的PCR条件尝试各种方法就是P不出条带（也做过梯度PCR45-57℃），
但是因为一个意外PCR条件采用了②条件，扩增出了正确的产物。
对此想请教为什么错误的条件②可以P出正确产物，且以后的验证实验是不是也需要采取②条件。
谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
百代繁华一朝都，谁非过客；千秋明月吹角寒，花是主人；江山图一快，人，不见血，刀，不收锋。
1楼 2014-04-06 09:50:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ming0515

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by apety at 2014-04-06 12:12:05
72℃搞2Min，55℃1Min。话说，你用的的是mix还是自己混合的？

自己混合的，正常条带的延伸时间1Kb/min，
但是用正常的①条件，P不出条带，而②条件却可以，对此不懂。
赞一下 回复此楼
百代繁华一朝都，谁非过客；千秋明月吹角寒，花是主人；江山图一快，人，不见血，刀，不收锋。
5楼2014-04-06 12:24:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ming0515(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-06 16:22:31
ming0515: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2014-04-07 16:55:43
如果lz两个pcr条件，只是各个温度时间长短不一样，而TM值等其他条件都一样，那么既然可以得出正确条带，以后验证时当然也用这个条件。
赞一下 回复此楼
有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
2楼2014-04-06 11:21:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

apety

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ming0515: 金币+1 2014-04-07 16:55:56
72℃搞2Min，55℃1Min。话说，你用的的是mix还是自己混合的？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-06 12:12:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ming0515

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 867575969 at 2014-04-06 11:21:19
如果lz两个pcr条件，只是各个温度时间长短不一样，而TM值等其他条件都一样，那么既然可以得出正确条带，以后验证时当然也用这个条件。

关键是，条件②不是正常的PCR条件啊，因为退火时间和延伸时间是相反的。。。
赞一下 回复此楼
百代繁华一朝都，谁非过客；千秋明月吹角寒，花是主人；江山图一快，人，不见血，刀，不收锋。
4楼2014-04-06 12:22:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 材料与化工考研调剂 +7 孅華 2026-03-22 7/350 2026-03-24 21:04 by greychen00
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +18 chaojifeixia 2026-03-19 20/1000 2026-03-24 10:34 by dolphin_ycj
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap－
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 15/750 2026-03-20 19:40 by 丁丁*
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭