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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

[求助] 求助:酶切的疑惑 已有3人参与

最近做酶切,老是切不好,求帮助。
(1)回收不到东西:图1是回收之前的带。图2是回收之后的带,已经弥散。


(2)做转化鉴定,发现原来质粒未酶切完全。但是回收后的条带有稍微的弥散,这是什么原因?如图3.

(3)图4中圆圈指示的区域是什么?是弥散的还是。。。。??

望解答。急求。

求助:酶切的疑惑
图1


求助:酶切的疑惑-1
图2


求助:酶切的疑惑-2
图3


求助:酶切的疑惑-3
图4
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2014-04-09 21:29:13
回收需要注意的一些问题:
1.如果你已经看到目标条带,那么切胶时,要尽量保证把条带切下,而不切下太多的胶,
当然也不能把条带切坏(不过我一直困惑,如果我把条带切碎了到底能不能回收回来,未解啊!)
2.回 ...

1.条带切碎了,片段应该不会碎吧,即使碎了,也不会连上呀。
2.这个方法真没试过
3.我用的试剂盒,不用烘干的
4.这应该是条带量太少了,不过还是你那句话 还是看到条带才放心
非常感谢
13楼2014-04-10 10:48:33
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-05 10:20:12
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-05 10:57:51
鬼羽帝魂: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-08 21:45:41
1. 回收不到东西: 看看你的TAE的pH值是否正确,我们实验室曾经有一次TAE 的PH值不正确导致回收不了DNA。另外你胶回收的洗脱液用的是什么,是水么?洗脱液的PH好像要在8左右,保持碱性,要不然洗脱不下来。
2. 未酶切完全,回收回来的可能就有质粒,你那弥散可能就是质粒。
3. 你圈的东西是不是因为跑胶的问题导致的呢,看你胶配的不是很好,另外,给个建议,不要用这么大的孔来跑,我觉得这样会导致弥散严重,建议用正常的胶回收孔来跑(个人建议)。
  希望对你有帮助。
2楼2014-04-05 10:01:41
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-05 10:01:41
1. 回收不到东西: 看看你的TAE的pH值是否正确,我们实验室曾经有一次TAE 的PH值不正确导致回收不了DNA。另外你胶回收的洗脱液用的是什么,是水么?洗脱液的PH好像要在8左右,保持碱性,要不然洗脱不下来。
2. 未酶 ...

谢谢。        我是用试剂盒里的Eluent洗脱的。   回收的质粒弥散是不是降解了?
3楼2014-04-05 10:19:57
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d00614028

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-04-05 10:19:57
谢谢。        我是用试剂盒里的Eluent洗脱的。   回收的质粒弥散是不是降解了?...

你这回收的是质粒还是酶切产物啊,我晕了,要是质粒的话质粒形态差不多就是那样的,酶切产物的话  你不是说你的质粒未完全酶切开么,混有了质粒大概就是那样了,  DNA做个酶切胶回收还不至于降解的。
4楼2014-04-05 10:56:31
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