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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 电泳图片和质粒浓度不相符……
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shouhu87

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 电泳图片和质粒浓度不相符…… 已有3人参与

用生工的试剂盒做了一次质粒大提，电泳图片中目的条带很亮，估计质粒浓度约700ug/ml，但是测得的质粒浓度只有200ug/ml，各位大神帮忙看一下。
电泳图中，泳道3是提取的质粒，泳道2是质粒用酚—氯仿抽提后，抽提后发现质粒没有了……

电泳图片和质粒浓度不相符……
图片1.jpg
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1楼 2014-04-02 16:57:10
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心碎

新虫 (小有名气)
★
shouhu87(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-03 19:15:13
酚氯仿抽提后，用乙酸钠和无水乙醇沉淀，离心应该有的啊，是不是质粒浓度太低，导致检测不到啊，可以冻干后小体积溶解，再走电泳试试看。
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shouhu87
实验顺利，其他都是浮云
7楼2014-04-03 16:57:03
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流， 2014-04-02 17:44:48
我也出现过这种状况，胶回收后跑电泳很亮的条带，去测浓度只有5ng/ul。可能是nano drop有问题，我感觉测得不是很准。
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shouhu87
2楼2014-04-02 17:17:16
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cm8002

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-02 21:12:37
泳道2抽提的是哪里的质粒呢？直接从菌液里来的？菌液量太小，或者最后溶质粒用的溶液太多；至于测的浓度，不知道你们是用什么仪器检测的，有的很山寨的，结果是不可靠
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shouhu87
3楼2014-04-02 20:52:32
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shouhu87

铁杆木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by cm8002 at 2014-04-02 20:52:32
泳道2抽提的是哪里的质粒呢？直接从菌液里来的？菌液量太小，或者最后溶质粒用的溶液太多；至于测的浓度，不知道你们是用什么仪器检测的，有的很山寨的，结果是不可靠

泳道2 的是我原来提取的质粒，测浓度的时候260/280的数值超过2了，所以我抽提纯化了一下，发现抽提之后质粒没有了，我用1ml质粒溶液做抽提，用80ul溶解的质粒。检测仪器是eppendorf的检测仪……而且我用标准品做过对照，结果偏差不是很大。有时候我在怀疑是不是提取的质粒不够纯影响检测了？
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4楼2014-04-02 20:59:31
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