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摩羯的心

铁虫 (小有名气)

[求助] takara 热启动酶 已有3人参与

各位虫友 谁用过takara的热启动酶,我之前用普通taq酶能P出来的样品 现在换成热启动酶 为什么P不出目的条带了 程序是:92度 预变性4min ,92度 40s
58度 40s 72度 1min 30s,35个循环,最后72度延伸7min 大家帮忙分析是怎么回事呢
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

热启动TAQ酶经过修饰,一般在95度加热5-10分钟活性中心才会暴露,才会产生聚合作用,热启动TAQ酶对扩增的特异性非常重要,但目前国内能生产性能较好的热启动TAQ酶的公司并不多,用的较多的主要有QIAGEN、BIOLINE、BIODAI等,建议楼主再提高些温度
5楼2019-03-28 15:55:14
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
摩羯的心(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-02 09:46:55
摩羯的心: 金币+1 2014-04-03 09:10:03
酶就这样,我们实验室有时用普通Taq扩出来,用高保真酶扩不出来。我们一般是用普通Taq酶扩出来多送几个样测序,挑没有突变的样做下一步工作。
hehe
2楼2014-04-02 09:33:53
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cm8002

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
摩羯的心: 金币+1 2014-04-03 09:09:57
这个得仔细看看说明书,我记得takara的高保真酶退火变性不需要那么长时间,看你的目的基因长度,应该15s左右就差不多
3楼2014-04-02 21:20:57
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cxkhhh

新虫 (小有名气)

在50μl的反应体系里, BIOGHC DNA Polymerase的用量最好不要低于1.5 U。PCR反应开始前,应将反应混合物95℃加热6分钟。一般地,反应条件可设置为:95℃,30 sec;55℃,30sec;72℃,30sec (500bp以内)。
4楼2019-02-20 15:32:32
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