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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » takara 热启动酶
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摩羯的心

铁虫 (小有名气)

[求助] takara 热启动酶 已有3人参与

各位虫友 谁用过takara的热启动酶，我之前用普通taq酶能P出来的样品 现在换成热启动酶 为什么P不出目的条带了 程序是：92度 预变性4min ，92度 40s
58度 40s 72度 1min 30s，35个循环，最后72度延伸7min 大家帮忙分析是怎么回事呢
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1楼 2014-04-01 20:11:34
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cm8002

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
摩羯的心: 金币+1 2014-04-03 09:09:57
这个得仔细看看说明书，我记得takara的高保真酶退火变性不需要那么长时间，看你的目的基因长度，应该15s左右就差不多
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3楼2014-04-02 21:20:57
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
摩羯的心(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-02 09:46:55
摩羯的心: 金币+1 2014-04-03 09:10:03
酶就这样，我们实验室有时用普通Taq扩出来，用高保真酶扩不出来。我们一般是用普通Taq酶扩出来多送几个样测序，挑没有突变的样做下一步工作。
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hehe
2楼2014-04-02 09:33:53
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cxkhhh

新虫 (小有名气)
在50μl的反应体系里， BIOGHC DNA Polymerase的用量最好不要低于1.5 U。PCR反应开始前，应将反应混合物95℃加热6分钟。一般地，反应条件可设置为：95℃，30 sec；55℃，30sec；72℃，30sec (500bp以内)。
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4楼2019-02-20 15:32:32
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

热启动TAQ酶经过修饰，一般在95度加热5-10分钟活性中心才会暴露，才会产生聚合作用，热启动TAQ酶对扩增的特异性非常重要，但目前国内能生产性能较好的热启动TAQ酶的公司并不多，用的较多的主要有QIAGEN、BIOLINE、BIODAI等，建议楼主再提高些温度
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5楼2019-03-28 15:55:14
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