【答案】应助回帖

1楼2014-03-31 09:15:04

buleini

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2楼: Originally posted by 莫莫爱沐沐 at 2014-04-03 19:49:44
下面是蛋白质测定的方法：定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。考马斯亮蓝法（Bradford法）。
凯氏定氮灵敏度低，适用于0.2~ 1.0mg氮，误差为 ±2％费时
8～10小时将蛋 ...

你好，血液有红色，不知道这样对根据显色反应测定蛋白质含量的考马斯亮蓝的测定有影响吗？

3楼2014-04-04 08:54:04

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莫莫爱沐沐

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下面是蛋白质测定的方法：定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。考马斯亮蓝法（Bradford法）。
凯氏定氮灵敏度低，适用于0.2~ 1.0mg氮，误差为 ±2％费时
8～10小时将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长
双缩脲法（Biuret法）灵敏度低 1～20mg 中速 20~30分钟多肽键＋碱性Cu2＋®紫色络合物硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似
紫外吸收法较为灵敏 50～100mg 快速 5～10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收各种嘌吟和嘧啶；
Folin－酚试剂法（Lowry法）灵敏度高～5mg 慢速 40～60分钟双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；
各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化
考马斯亮蓝法(Bradford法) 灵敏度最高 1～5mg 快速5～15分钟考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax由465nm变为595nm 强碱性缓冲液；
SDS 最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同蛋白质变化

2楼2014-04-03 19:49:44

莫莫爱沐沐

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3楼: Originally posted by buleini at 2014-04-04 08:54:04
你好，血液有红色，不知道这样对根据显色反应测定蛋白质含量的考马斯亮蓝的测定有影响吗？...

是测总的蛋白质含量吗？就是包括血红蛋白吗？如果测出血红蛋白外的蛋白质含量，可以让血液凝固，就会分层，上层血浆为无色就容易测定了。如果测得包括血红蛋白的蛋白质含量，就加水是红细胞脱水破裂，血红蛋白就融出了，同样测定即可。

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4楼2014-04-08 21:30:22

buleini

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4楼: Originally posted by 莫莫爱沐沐 at 2014-04-08 21:30:22
是测总的蛋白质含量吗？就是包括血红蛋白吗？如果测出血红蛋白外的蛋白质含量，可以让血液凝固，就会分层，上层血浆为无色就容易测定了。如果测得包括血红蛋白的蛋白质含量，就加水是红细胞脱水破裂，血红蛋白就融 ...

我是要把血浆和血细胞分开的，并且加水超声波使血红蛋白溶出，想要测全血，血浆，血红蛋白液的蛋白含量，不知道用哪种方法比较好，考虑双缩脲和考马斯亮蓝法，对于实验条件和现有试剂来说，双缩脲比较方便，同学配制的双缩脲，有沉淀，这个有影响吗？

5楼2014-04-09 10:28:48