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wendyzx

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问有没有人做原核的5’RACE,能不能给推荐个试剂盒? 已有2人参与

请问有没有人做原核的5’RACE,能不能给推荐个试剂盒?
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wendyzx: 金币+2, ★★★很有帮助, 很有帮助 2014-03-30 14:57:51
myprayer: 金币+3, MolEPI-1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-03-30 16:47:07
myprayer: MolEPI+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-03-30 16:47:34
5’RACE的原理有很多,一般而言,可以分为以下几种:
α,最古老的5‘RACE,使用末端转移酶在cDNA第一链的末端加T tract。
β,依赖于cap结构的,采用只有烟草酸焦磷酸酶才能让cap脱磷,使用linker特异性的连接mRNA的5’端,这种策略较第一种有较大改进。
γ,依赖于MMLV末端非模板扩征能力,进行链转移的。
对于原核系统,严谨度最高的β方案用不上,α方案假阳性太多现在基本上已经淘汰
Clonetech有一款用γ方案的kit,叫做SMART……可以考虑
或者选用类似方案的其他kit
6楼2014-03-30 13:40:19
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普通回帖

Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

这个看接头了
2楼2014-03-29 23:02:34
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neuralcrest

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
大连宝生物的还可以,不妨试一下
有朋自网上来不亦乐乎
3楼2014-03-30 10:40:42
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wendyzx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Fleaves at 2014-03-29 23:02:34
这个看接头了

什么意思呢,能否指点一下,第一次做不是很懂
4楼2014-03-30 12:40:14
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wendyzx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by neuralcrest at 2014-03-30 10:40:42
大连宝生物的还可以,不妨试一下

据了解宝生物的只能做真核的,不知道是不是这样的?
5楼2014-03-30 12:41:55
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wendyzx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-30 13:40:19
5’RACE的原理有很多,一般而言,可以分为以下几种:
α,最古老的5‘RACE,使用末端转移酶在cDNA第一链的末端加T tract。
β,依赖于cap结构的,采用只有烟草酸焦磷酸酶才能让cap脱磷,使用linker特异性的连接mR ...

非常感谢高手指点,受益匪浅啊!我查一下这个试剂盒
7楼2014-03-30 15:00:05
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wendyzx at 2014-03-30 12:40:14
什么意思呢,能否指点一下,第一次做不是很懂...

要不然别做RACE了,不好做
还不如试试染色体步移
8楼2014-03-30 18:16:19
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wendyzx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Fleaves at 2014-03-30 18:16:19
要不然别做RACE了,不好做
还不如试试染色体步移...

我主要是想拿到一个基因的转录起始位点。还没接触过染色体步移,不知道您说的这个方法能得到这个结果吗?
9楼2014-03-31 17:33:45
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neuralcrest

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wendyzx at 2014-03-30 12:40:14
什么意思呢,能否指点一下,第一次做不是很懂...

我没做过原核的, 不清楚
有朋自网上来不亦乐乎
10楼2014-03-31 18:19:23
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