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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] tail pcr条带弥散 已有2人参与

用takara的genome walking试剂盒扩增侧翼序列，感觉嵌套引物没有什么问题，但就是扩出来的条带是弥散的，3rd的条带还不如2nd，有没有人做过帮忙分析下原因？

tail pcr条带弥散
fyt 2014-03-27 23hr 03min.jpg
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1楼 2014-03-28 08:25:39
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-28 16:24:01
首先，我觉得你的胶有问题。这不算弥散吧，出现这种现象可能是电压过高或者胶不均匀。另外，做tail，这个结果很不错呀，选择合适的测序吧。
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我不会！
2楼2014-03-28 14:42:46
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-03-28 14:42:46
首先，我觉得你的胶有问题。这不算弥散吧，出现这种现象可能是电压过高或者胶不均匀。另外，做tail，这个结果很不错呀，选择合适的测序吧。

这个结果可以吗？我第一次做，不会从里面选合适的条带啊，感觉都不怎么样
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3楼2014-03-28 14:55:46
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
夏天的普洱茶(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-12 17:14:03
我觉得你得做个好点的胶，然后你要明确你的目的DNA是多大，根据这个来选取几个切胶回收，然后转化测序。我也只做过一次。
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我不会！
4楼2014-03-28 16:43:31
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-03-28 16:43:31
我觉得你得做个好点的胶，然后你要明确你的目的DNA是多大，根据这个来选取几个切胶回收，然后转化测序。我也只做过一次。

我的DNA多大我不清楚啊，是未知的，现在P出来一个片段，想通过TAIL PCR扩得全长，我不知道该选择哪一个片段回收，我看说明书上，人家最后一轮的条带很单一的
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5楼2014-03-28 16:49:24
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薰衣草871110

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
夏天的普洱茶(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-12 17:13:37
你做一个高浓度的胶，再跑一遍试试！电压少点！应该条带会比较清晰！
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6楼2014-04-11 09:46:07
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 薰衣草871110 at 2014-04-11 09:46:07
你做一个高浓度的胶，再跑一遍试试！电压少点！应该条带会比较清晰！

请问你用过TAIL PCR吗？我用的刘耀光老师文献里的随机引物，扩不出来，这些随机引物适用于细菌吗？还是只适用于植物什么的
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7楼2014-04-11 11:14:06
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薰衣草871110

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
夏天的普洱茶(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-12 17:13:47
你最好还是找与你研究的内容相近的随机引物，不同的有差别！
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8楼2014-04-12 16:31:17
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 薰衣草871110 at 2014-04-12 16:31:17
你最好还是找与你研究的内容相近的随机引物，不同的有差别！

但是我没看到关于细菌的随机引物的报道啊，有些文献也只是说明参考了刘耀光的文章，没有说明随机引物用的什么
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9楼2014-04-12 18:08:35
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薰衣草871110

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

基本上大家都用刘的引物，要不你也先试一下吧！
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10楼2014-04-13 12:03:10
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