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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 酸洗玻璃珠回收问题
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飘逸的云

新虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-27 14:30:21
这个我做的比较多，你买的珠子是0.2mm的细小的珠子么，要是的话按上面说的酸洗就OK，我一般酸泡过夜，然后用水清洗10遍，烘干灭菌。

至于提蛋白的时候加多少，我是2OD的酵母细胞加100ul的珠子，100ul怎么控制的话 ...

我买的好像是400μm的。OD只有2的话会不会太稀了，我看pyes2/ct说明书上写的是OD50到100。还有就是漩涡震荡15分钟中间一般要冰浴多少次啊
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11楼2014-03-27 21:51:48
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d00614028

银虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2014-03-27 21:51:48
我买的好像是400μm的。OD只有2的话会不会太稀了，我看pyes2/ct说明书上写的是OD50到100。还有就是漩涡震荡15分钟中间一般要冰浴多少次啊...

你试验目的是干嘛，如果是纯粹的做western检验，2OD的酵母细胞足够，如果是做IP或者pull down的话则至少要100OD的量，纯粹蛋白western检验的话中途不要冰浴的，要是做IP震荡2min冰浴1min的来
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12楼2014-03-27 22:16:49
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飘逸的云

新虫 (小有名气)
感谢指导，我是要破胞测酶活

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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13楼2014-03-27 23:03:12
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d00614028

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2014-03-27 23:03:12
感谢指导，我是要破胞测酶活

测酶活要冰浴的，条件和IP的一样，防止气泡破裂造成的高温使酶失活。我用这种方法测过碱性磷酸酶的活性。
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14楼2014-03-29 11:50:13
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飘逸的云

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-29 11:50:13
测酶活要冰浴的，条件和IP的一样，防止气泡破裂造成的高温使酶失活。我用这种方法测过碱性磷酸酶的活性。...

好的，谢谢啦

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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15楼2014-03-29 22:52:36
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飘逸的云

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-29 11:50:13
测酶活要冰浴的，条件和IP的一样，防止气泡破裂造成的高温使酶失活。我用这种方法测过碱性磷酸酶的活性。...

再请教一下，你破胞的时候用的是什么缓冲液啊？
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16楼2014-03-31 21:04:14
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hutil1543

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2014-03-25 15:43:11
水和盐酸比大概是多少啊？漩涡震荡仪应该就可以了吧...

相信我，涡旋震荡的力度绝不会让你满意的。
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17楼2014-04-01 13:41:30
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nulilimin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-03-25 15:37:49
玻璃珠可以重复利用，加在自来水里面加点HCl就可以，HCl加入的量我当时是凭感觉的，然后浸泡10min用清水冲洗干净，灭菌即可

我用玻璃珠破碎酵母时，由于我们有那种震荡的仪器，通过剧烈震荡，然后提DNA和蛋白质， ...

亲爱的朋友，看了你多个关于玻璃珠破碎细胞的回复，我想问一下什么情况下应给用玻璃珠破碎呢？这种方式和超声破碎相比的优点在哪里？我是做化学的实验室，实验室有超声破碎仪，养过的细胞有HEPG2 MCF7 CACO2 等。求回回复，非常感谢。
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赠人玫瑰，手有余香。
18楼2017-02-12 20:32:04
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0514024132

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-27 14:30:21
这个我做的比较多，你买的珠子是0.2mm的细小的珠子么，要是的话按上面说的酸洗就OK，我一般酸泡过夜，然后用水清洗10遍，烘干灭菌。

至于提蛋白的时候加多少，我是2OD的酵母细胞加100ul的珠子，100ul怎么控制的话 ...

请问你跟哪家公司购买玻璃珠，能提供下吗，谢谢
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19楼2017-08-14 08:49:19
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