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飘逸的云

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-27 14:30:21
这个我做的比较多,你买的珠子是0.2mm的细小的珠子么,要是的话按上面说的酸洗就OK,我一般酸泡过夜,然后用水清洗10遍,烘干灭菌。

至于提蛋白的时候加多少,我是2OD的酵母细胞加100ul的珠子,100ul怎么控制的话 ...

我买的好像是400μm的。OD只有2的话会不会太稀了,我看pyes2/ct说明书上写的是OD50到100。还有就是漩涡震荡15分钟中间一般要冰浴多少次啊
11楼2014-03-27 21:51:48
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d00614028

银虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2014-03-27 21:51:48
我买的好像是400μm的。OD只有2的话会不会太稀了,我看pyes2/ct说明书上写的是OD50到100。还有就是漩涡震荡15分钟中间一般要冰浴多少次啊...

你试验目的是干嘛,如果是纯粹的做western检验,2OD的酵母细胞足够,如果是做IP或者pull down的话则至少要100OD的量,纯粹蛋白western检验的话中途不要冰浴的,要是做IP震荡2min冰浴1min的来
12楼2014-03-27 22:16:49
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飘逸的云

新虫 (小有名气)

感谢指导,我是要破胞测酶活

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
13楼2014-03-27 23:03:12
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d00614028

银虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2014-03-27 23:03:12
感谢指导,我是要破胞测酶活

测酶活要冰浴的,条件和IP的一样,防止气泡破裂造成的高温使酶失活。我用这种方法测过碱性磷酸酶的活性。
14楼2014-03-29 11:50:13
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飘逸的云

新虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-29 11:50:13
测酶活要冰浴的,条件和IP的一样,防止气泡破裂造成的高温使酶失活。我用这种方法测过碱性磷酸酶的活性。...

好的,谢谢啦

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
15楼2014-03-29 22:52:36
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飘逸的云

新虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-29 11:50:13
测酶活要冰浴的,条件和IP的一样,防止气泡破裂造成的高温使酶失活。我用这种方法测过碱性磷酸酶的活性。...

再请教一下,你破胞的时候用的是什么缓冲液啊?
16楼2014-03-31 21:04:14
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hutil1543

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2014-03-25 15:43:11
水和盐酸比大概是多少啊?漩涡震荡仪应该就可以了吧...

相信我,涡旋震荡的力度绝不会让你满意的。
17楼2014-04-01 13:41:30
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nulilimin

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-03-25 15:37:49
玻璃珠可以重复利用,加在自来水里面加点HCl就可以,HCl加入的量我当时是凭感觉的,然后浸泡10min用清水冲洗干净,灭菌即可

我用玻璃珠破碎酵母时,由于我们有那种震荡的仪器,通过剧烈震荡,然后提DNA和蛋白质, ...

亲爱的朋友,看了你多个关于玻璃珠破碎细胞的回复,我想问一下什么情况下应给用玻璃珠破碎呢?这种方式和超声破碎相比的优点在哪里?我是做化学的实验室,实验室有超声破碎仪,养过的细胞有HEPG2 MCF7 CACO2 等。求回回复,非常感谢。
赠人玫瑰,手有余香。
18楼2017-02-12 20:32:04
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0514024132

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-27 14:30:21
这个我做的比较多,你买的珠子是0.2mm的细小的珠子么,要是的话按上面说的酸洗就OK,我一般酸泡过夜,然后用水清洗10遍,烘干灭菌。

至于提蛋白的时候加多少,我是2OD的酵母细胞加100ul的珠子,100ul怎么控制的话 ...

请问你跟哪家公司购买玻璃珠,能提供下吗,谢谢
19楼2017-08-14 08:49:19
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