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大神帮忙看看原核表达的结果。。。咋这样？ 已有2人参与
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最近一直在做原核表达，结果让我都快疯了。。。 我做的这个基因很多前辈做了发现结果都不表达。。。导师交给我，经过分析，发现目的基因有很多稀有密码子氨基酸，随之换Rosetta菌株，发现表达结果跟以前不一样了！ 请看图：左边两个相同的是不加诱导剂空白对照和空载对照，后面分别是不同IPTG浓度梯度，最后一条为Marker（质量不好，第一条90KDa的，第二条60KDa）目的蛋白64KDa Q1：为什么加入诱导剂后，很多非目的蛋白集体边稀了？（第四孔道样品是在煮沸时进了水=_=，但是之前跑了几块的确都变稀了，所以应该不是溶液溶度被稀释的问题） Q2：因为变得稀释，我的目的蛋白是否表达了？（与对照相比，从上往下第三条亮带，图片上对照组下面是空白的，而加诱导剂后的有一条很细的带，在一定诱导条件下有最大表达，当然 这都是我认为的） Q3：接上问，其实肉眼可以看到空白对照有一个在我的目的蛋白大小处，有很细的一条线，但是在凝胶成像系统上，荧光照后，照片结果也看不出来，这是怎么回事？因为这个原因，更觉着目的蛋白是否表达了。 求大神赐教。。。。。。 多谢~  IMG_20140314_140608.jpg |
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快乐农夫
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