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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 毕赤酵母发酵诱导表达
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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 毕赤酵母发酵诱导表达 已有5人参与

毕赤酵母发酵过程中，甲醇的诱导浓度是否与菌体生长密度有关系呢，例如第一批菌体OD600值300左右，第二批菌体OD600值500左右，那么第二批是否要将甲醇诱导浓度增加呢？
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1楼 2014-03-12 09:26:23
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dllchina: 金币+3, 谢谢应助 2014-03-16 11:22:50
按你描述的，肯定是发酵罐了。多大的？甘油补料后，OD在300左右诱导最为合适。500太大，诱导不了了。你的第一批和第二批是什么意思？一级种子和二级种子吗？
毕赤酵母的诱导不好做，需要把控的点非常准确，很容易诱导失败或者表达结果不理想。
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3楼2014-03-13 19:41:05
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by bio-boy at 2014-03-16 10:53:03
是的，50L的发酵罐，第一批和第二批指的是两次单独的实验。OD500时为什么诱导不了了？...

OD太大，菌的活力已经不够了，诱导产量会很低。
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5楼2014-03-18 00:15:15
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reallpf

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by bio-boy at 2014-03-18 22:20:03
不是高密度培养吗？...

高密度并不是诱导的时候OD越大越好，而是开始诱导后，OD值越来越大是较好的。
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10楼2014-03-19 00:06:40
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by bio-boy at 2014-03-24 10:10:49
请问有文献实验依据吗？...

这个是有依据的，但是具体的我不能给出文献的题目了。你可以搜索下毕赤酵母发酵以及响应面分析相关的文章看看。
另外这个常识问题通过摇瓶也是可以得到验证的，并不是诱导时OD越大越好的。
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13楼2014-03-24 22:38:08
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by bio-boy at 2014-04-03 12:35:26
诱导后菌体OD再继续增加，那么补入的碳氮源大部分被用于菌体物质的构建了，请问合成蛋白所需的原料相应的要减少了，表达量怎么会增加？！...

都是个人意见，仅供参考。

你想的角度是对的，但是不要钻牛角尖，任何都是需要一个适度，小了不行，太大了也不行，这些都是前人的经验总结而来的。

所有回复的观点均可以直接通过实验来验证。祝好运！
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15楼2014-04-04 00:33:52
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by wentanbaodao at 2014-04-09 11:01:00
哥们，你看好了，人家是用的酵母表达，不是大肠，和甘油有啥关系？补的是甲醇...

常识性的问题争辩意义不大。

毕赤酵母一级种子做好后转达二级罐，碳源消耗完毕后OD值较小，不适合直接甲醇诱导，需要继续添加甘油连续碳源补料，到达合适的OD值后才补料甲醇进行诱导。

你做毕赤酵母吗？毕赤酵母就和甘油没有关系？看帖子也要把描述的问题看清楚了再说成么。
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17楼2014-04-10 16:54:21
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