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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 毕赤酵母发酵诱导表达
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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 毕赤酵母发酵诱导表达 已有5人参与

毕赤酵母发酵过程中，甲醇的诱导浓度是否与菌体生长密度有关系呢，例如第一批菌体OD600值300左右，第二批菌体OD600值500左右，那么第二批是否要将甲醇诱导浓度增加呢？
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1楼 2014-03-12 09:26:23
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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)
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3楼: Originally posted by reallpf at 2014-03-13 19:41:05
按你描述的，肯定是发酵罐了。多大的？甘油补料后，OD在300左右诱导最为合适。500太大，诱导不了了。你的第一批和第二批是什么意思？一级种子和二级种子吗？
毕赤酵母的诱导不好做，需要把控的点非常准确，很容易诱 ...

是的，50L的发酵罐，第一批和第二批指的是两次单独的实验。OD500时为什么诱导不了了？
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4楼2014-03-16 10:53:03
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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)
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6楼: Originally posted by baoqie121314 at 2014-03-18 05:07:47
你不要用OD测量啊，太大就不准了，测量湿重，而且加甲醇诱导与DO有关也，你应该补加甲醇，不是一次性加多少，量大，毒性就大

发酵液稀释以后再测OD啊，是梯度流加的甲醇，不是分批加入的。
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8楼2014-03-18 22:19:09
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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)
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5楼: Originally posted by reallpf at 2014-03-18 00:15:15
OD太大，菌的活力已经不够了，诱导产量会很低。...

不是高密度培养吗？
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9楼2014-03-18 22:20:03
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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)
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10楼: Originally posted by reallpf at 2014-03-19 00:06:40
高密度并不是诱导的时候OD越大越好，而是开始诱导后，OD值越来越大是较好的。...

请问有文献试验依据吗？
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11楼2014-03-22 13:32:51
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铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by reallpf at 2014-03-19 00:06:40
高密度并不是诱导的时候OD越大越好，而是开始诱导后，OD值越来越大是较好的。...

请问有文献实验依据吗？
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12楼2014-03-24 10:10:49
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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)
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13楼: Originally posted by reallpf at 2014-03-24 22:38:08
这个是有依据的，但是具体的我不能给出文献的题目了。你可以搜索下毕赤酵母发酵以及响应面分析相关的文章看看。
另外这个常识问题通过摇瓶也是可以得到验证的，并不是诱导时OD越大越好的。...

诱导后菌体OD再继续增加，那么补入的碳氮源大部分被用于菌体物质的构建了，请问合成蛋白所需的原料相应的要减少了，表达量怎么会增加？！
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14楼2014-04-03 12:35:26
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