24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

feiyun2006

铁虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 1194.7
散金: 4
帖子: 59
在线: 33.6小时
虫号: 1402490
注册: 2011-09-15
性别: MM
专业: 生物化学

[求助] 求芽孢杆菌穿梭质粒以及基因敲除经验已有1人参与

(1) 利用同源重组希望敲掉几个基因，电转化线状质粒。经抗生素筛选后有挑到几个克隆，但PCR检测结果均与预期不符合，
是否抗性基因会插入其他非预期的位置？或者还有其他原因？不知道芽孢杆菌基因敲除有啥要注意的地方，可以多交流下经验
(2) 我们的实验没有阳性对照，所以我们希望首先能利用穿梭质粒来验证转化方法是否正确。谁有能在芽孢杆菌中复制的质粒啊，能否赠送？

回复此楼

» 猜你喜欢

生物质超级电容器已经有0人回复
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有284人回复
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点已经有0人回复
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复

心静自然凉

1楼 2014-03-11 10:51:07

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

feiyun2006

铁虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 1194.7
散金: 4
帖子: 59
在线: 33.6小时
虫号: 1402490
注册: 2011-09-15
性别: MM
专业: 生物化学

引用回帖:

13楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2014-03-19 09:15:47
如果目的片段具左右同源臂，以环状质粒转进目标菌后，是不是先发生单交换，质粒整合到基因组上；然后再发生二次重组，质粒片段丢弃？如果线性质粒的话，是直接进行相当于前述的二次重组？不太懂，求指教。

另： ...

我比较赞同你的观点，线状片段只有发生了双交换的才能进行抗性筛选。你们实验室是怎么做芽孢杆菌基因敲除的啊？
接合转移我没做过。