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feiyun2006

铁虫 (小有名气)

[求助] 求芽孢杆菌穿梭质粒以及基因敲除经验 已有1人参与

(1) 利用同源重组希望敲掉几个基因,电转化线状质粒。经抗生素筛选后有挑到几个克隆,但PCR检测结果均与预期不符合,
是否抗性基因会插入其他非预期的位置?或者还有其他原因?不知道芽孢杆菌基因敲除有啥要注意的地方,可以多交流下经验
    (2) 我们的实验没有阳性对照,所以我们希望首先能利用穿梭质粒来验证转化方法是否正确。谁有能在芽孢杆菌中复制的质粒啊,能否赠送?
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心静自然凉
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by feiyun2006 at 2014-03-18 22:44:08
(1) 从我看的文献来看,环状质粒由于结构的原因多用于单交换;而双交换进行的同源重组则一般采用线状片段。Mol Biol Rep (2010) 37:2207–2213
(2) 效率是不是更高还真不知道,希望多指点指点...

如果目的片段具左右同源臂,以环状质粒转进目标菌后,是不是先发生单交换,质粒整合到基因组上;然后再发生二次重组,质粒片段丢弃?如果线性质粒的话,是直接进行相当于前述的二次重组?不太懂,求指教。

另:接合转移的话,转入的是线性质粒吗?
做一个阳光、开朗的小和尚
13楼2014-03-19 09:15:47
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句号123

新虫 (初入文坛)


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-03-11 14:32:16
本帖内容被屏蔽

2楼2014-03-11 12:38:23
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feiyun2006

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 句号123 at 2014-03-11 12:38:23
PHT43 PHT01 可以吗

应该可以吧,你们是用什么方法转化的啊?
心静自然凉
3楼2014-03-11 14:21:16
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句号123

新虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

4楼2014-03-11 15:58:07
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