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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 求芽孢杆菌穿梭质粒以及基因敲除经验
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feiyun2006

铁虫 (小有名气)

[求助] 求芽孢杆菌穿梭质粒以及基因敲除经验 已有1人参与

(1) 利用同源重组希望敲掉几个基因，电转化线状质粒。经抗生素筛选后有挑到几个克隆，但PCR检测结果均与预期不符合，
是否抗性基因会插入其他非预期的位置？或者还有其他原因？不知道芽孢杆菌基因敲除有啥要注意的地方，可以多交流下经验
    (2) 我们的实验没有阳性对照，所以我们希望首先能利用穿梭质粒来验证转化方法是否正确。谁有能在芽孢杆菌中复制的质粒啊，能否赠送？
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心静自然凉
1楼 2014-03-11 10:51:07
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feiyun2006

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2014-03-12 20:54:56
求关于线性质粒重组效率更高的参文，诚谢啊...

(1) 从我看的文献来看，环状质粒由于结构的原因多用于单交换；而双交换进行的同源重组则一般采用线状片段。Mol Biol Rep (2010) 37:2207–2213
(2) 效率是不是更高还真不知道，希望多指点指点
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心静自然凉
12楼2014-03-18 22:44:08
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句号123

新虫 (初入文坛)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-11 14:32:16
本帖内容被屏蔽
2楼2014-03-11 12:38:23
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feiyun2006

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 句号123 at 2014-03-11 12:38:23
PHT43 PHT01 可以吗

应该可以吧，你们是用什么方法转化的啊？
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心静自然凉
3楼2014-03-11 14:21:16
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句号123

新虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
4楼2014-03-11 15:58:07
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