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进行overlap pcr，结果不仅没有目的片段，跑胶的条带都比模板长度还短已有3人参与
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最近小弟正在做clone，想通过overlap pcr把两组已经fusion过的基因（两个基因已经连接了）再连接在一起， pcr也采用了2步法，先将两个模板（每个2μl）（长度都在1.5kb左右）以60°c退火温度，做15个循环 之后加1μl的F，1μ的R引物，再以touchdown（从60-50°c）做10个cycle，最后以50°c的退火温度循环25次 结果跑胶不仅没有目的条带，而且p出来的条带在500bp，和120bp 附：marker用的DM5000  3-10-(+u)2.jpg |
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zhaozhibozhi
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