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赵晓楠zxn

金虫 (初入文坛)

[求助] 基因扩不出来 已有4人参与

我有紫花苜蓿某个基因一段不完整的序列,blast结果显示蒺藜苜蓿与它同源性较高,为98%。根据蒺藜苜蓿完整的mRNA(大小为3310bp)设计引物,以紫花苜蓿的cDNA为模板,为什么扩不出来目的片段?
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在学术的汪洋里,扑腾。
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赵晓楠zxn

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-03-03 20:19:35
确定一下该基因表大么?再一个根据保守区段多设计几对引物,一定不要再UTR区域设计那地差异太大。

我后续是想做该基因在紫花苜蓿上过表达,现在首先是验证一下紫花苜蓿上是否有该基因。
在学术的汪洋里,扑腾。
7楼2014-03-04 09:48:30
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-04 08:42:12
赵晓楠zxn: 金币+3, 有帮助 2014-03-04 09:50:55
1、RNA抽的不好
2、引物设计的不好
3、实验操作技能可能存在问题
4、降低退火温度试试
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
2楼2014-03-03 19:02:01
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-04 08:42:15
赵晓楠zxn: 金币+3 2014-03-04 09:51:04
确定一下该基因表大么?再一个根据保守区段多设计几对引物,一定不要再UTR区域设计那地差异太大。
hehe
3楼2014-03-03 20:19:35
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acer_hp

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-04 08:42:19
赵晓楠zxn: 金币+3, 有帮助 2014-03-04 09:51:20
是不是太长了不好扩,要不换一种专门扩增长片段的酶,或者分两段扩增。
4楼2014-03-03 21:52:12
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